הדמיית ביטוי חלבון מבוססת קובייה: הליך להדמיית ביטוי חלבון בעובי מלא ביופסיות עור עכבר

Method Article

הדמיית ביטוי חלבון מבוססת קובייה: הליך להדמיית ביטוי חלבון בעובי מלא ביופסיות עור עכבר

April 30th, 2023

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Liang, H. et al. פרוטוקול CUBIC ממחיש ביטוי חלבונים ברזולוציה של תא בודד בתכשירים לעור שלם. J. Vis. Exp (2016)

סרטון זה מתאר את טכניקת ההדמיה מבוססת CUBIC, טכניקת הדמיה תלוית ניקוי רקמות להערכה חזותית של ביטוי חלבונים בביופסיות עור שלמות ברזולוציה של תא בודד בתלת-ממד. פרוטוקול טכני פשוט זה מאפשר הדמיה של חלבוני עור מבלי להכין קטעי עור.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים המערבים בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הכנת רקמת העור של העכבר השקוף

הערה: כל העכברים ששימשו במחקר זה היו על רקע גנטי C57BL/6

אוסף רקמת עור עכבר.
1. המתת חסד אנושית של העכברים על ידי פריקת צוואר הרחם.
2. יש להסיר בזהירות שערות מאזור העור הרלוונטי בעזרת גוזם המקפיד שלא לפצוע את העור.
3. יש לשטוף את העור כדי לטהר עם 70% אתנול במי מלח חוצצים פוספט (PBS).
4. להרים את עור הצוואר הגבי עם מלקחיים ולעשות חתך עם מספריים.
5. יש לנתח שטח גדול של עור העכבר ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: הכנת תא ההדמיה. ת: החומרים המתכלים הדרושים להכנת תא ההדמיה הם דבק כחול, בצק משחק או דומה, ו -2 כיסויים (24 x 50 מ"מ). B: מכינים שתי רצועות דקות של דבק כחול (קוטר כ-2X2 ס"מ), ושתי רצועות כיסוי. C: הניחו רצועות כחולות על כיסוי אחד, כדי לאפשר מספיק מקום לביופסיה של העור. מניחים את ביופסיית העור בטיפת תמיסת CUBIC2 בין שתי הרצועות. D: מניחים את הכ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לא הוכרז על ניגוד עניינים.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number
פרפורמאלדהיד	סיגמא-אולדריץ'	עמ' 6418
אתנול 96% (בלתי רווי)	אספקת כימיה	UN1170
4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)	רוש	10236276001
N,N,N',N'-טטרקיס (2-הידרוקסיפרופיל) אתילאנדיאמין	מרק מיליפור	821940
אתר פוליאתילן גליקול מונו-p-איזוקטיל פניל	מרק מיליפור	648462
טריטון X-100	מרק מיליפור	648462
סוכרוז	סיגמא-אולדריץ'	S0389
טמפרטורת חיתוך אופטימלית (אוק') תרכובת	רקמות-טק	4583
נוגדן נגד Keratin14	קובנס	PRB-155P
נוגדן נגד Ki67	אבקאם	dorit_16667
חמור נגד ארנב אלקסה 594	לייף טכנולוגיות	A21207
דימתיל-סולפוקסיד	סיגמא-אולדריץ'	D2650
אוריאה	מרק מיליפור	66612
2,2′,2′'-nitrilotriethanol	מרק מיליפור	137002
מיקרוסקופ קונפוקלי	Nikon Instruments Inc	Nikon A1 - מיקרוסקופ קונפוקלי
cruZer6 גוזם פנים	בראון	בראון cruZer6 פנים
נתרן אזיד	סיגמא-אולדריץ'	438456

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

הדמיית ביטוי חלבון מבוססת קובייה: הליך להדמיית ביטוי חלבון בעובי מלא ביופסיות עור עכבר

In This Article

Abstract

Protocol

Results

Disclosures

Materials

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles