בדיקת מינון אריתמטי מינימלי: שיטה למדידת רגישות UV במודלים עכבריים

תקציר

מקור: Amaro-Ortiz, A. et al. אינדוקציה פרמקולוגית של מלנין אפידרמיס והגנה מפני כוויות שמש במודל עכבר אנושי. J. Vis. Exp. (2013)

סרטון וידאו זה מתאר שיטה למדידת רגישות לקרינת UV במודל עכבר אנושי – מודל עכבר המחקה עור אנושי. אנו קובעים את המינון המינימלי של קרינת UV (MED) שעלולה לגרום לאריתמה או בצקת על העור. השיטה יכולה לעזור לגלות את היעילות של תרופות המשמשות להפחתת רגישות UV.

פרוטוקול

כל ההליכים המערבים בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

קביעת רגישות UV על ידי חישוב של "מינון אריתמטי מינימלי" (MED)

1. השתמש בבעלי חיים שטופלו מראש ברכב או בפורסקולין. להרדים בעלי חיים עם הזרקה intraperitoneal של תערובת סטנדרטית של קטמין ו xylazine.
2. הכינו חתיכת סרט UV-occlusive לבדיקת MED. כדי ליצור חורים בקלטת, השתמשו בניקוב חורים כבד עם חיתוך עגול בגודל 1 ס"מ רבוע (איורים 1A ו-B). הימצאות חורים בגודל מוגדר וסידור סימטרי בקלטת מאפשרת זיהוי שינויים בעור לאחר הקרנה. מעל כל חור בקלטת, יש למרוח פיסת סרט קטנה אך ניתנת להסרה בקלות שניתן להסיר בזמנים מוגדרים במהלך חשיפה לקרינת UV כדי לאפשר מתן של מנות UV שונות.
3. לאחר שבעלי חיים מורדמים כראוי, הניחו את הסרט על המשטח הגבי. תמיד יש להשתמש בחומר סיכה לעיניים בהרדמה.
4. הפעל את מקור UV המורכב משתי מנורות Westinghouse F15T8UV-B עם תפוקת שיא של 313 ננומטר וטווח של 280-370 ננומטר. אפשר למנורה להתאזן לתפוקת UV קבועה כפי שנמדדה על ידי פוטומטר UV עם חיישן UVB (בדרך כלל לוקח כמה דקות עד שהמנורות מתחממות).
5. בהתבסס על קצב העברת UV כפי שנמדד על ידי פוטומטר UV, חשב את זמן החשיפה UV עבור כל מנה רצויה. לדוגמה, תפוקת UVB של המנורה שלנו מודדת 2.4 mW/cm². לכן, כדי לתת 5 kJ / m², העור צריך להיות חשוף 208 שניות (שהם 3 דקות ו 28 שניות) של קרינת UVB, כפי שמחושב להלן:
   
6. הניחו בעלי חיים מורדמים (כל אחד עם סרט נסתר במקומו) משטח גחון למטה כדי להבטיח חשיפה אחידה לקרינת UV. כדי לנהל את המינונים שנבחרו של קרינת UV, הסר ברצף את הסרטים החוסמים הקטנים המכסים את החורים כדי לחשוף 1 ס"מ² אזורים של העור למינונים הנכונים של קרינה. לכן, אם נשתמש בדוגמה לעיל, אם 40 kJ/m² הוא המינון הגדול ביותר בניסוי, אז החיה תהיה מתחת למנורה במשך 27 דקות ו-47 שניות בסך הכל, ולעור במצב של 40 kJ/m² לא יהיה סרט מעל כל הזמן. עם זאת, סרט מעל התנאי 5 kJ/m² יוסר כאשר נותרו 208 שניות בחשיפה. העיתוי של הסרת קלטת צריך להיות כזה שכל תנאי מסתיים בו זמנית.
7. לאחר חשיפה לקרינת UV, יש לקלף בזהירות את הסרט מהעור הגבי, תוך הקפדה שלא לקרוע את העור בתנועות פתאומיות או חזקות מדי. הניחו את בעלי החיים במקום חמים ושקט כדי לאפשר התאוששות מהרדמה.
8. עקוב אחר עכברים במשך 24-48 שעות כדי לחפש אזורים דיסקרטיים של אריתמה (אדמומיות) או בצקת (נפיחות) המתאימים לאתרים האנטומיים שנחשפו למינון הספציפי של קרינת UV. לתעד את ממצאי העור בצילום.
9. ערך MED מתאים למינון המינימלי של UV הגורם לדלקת כפי שהוגדרה על ידי אריתמה ו / או בצקת של כל מעגל העור החשוף. שימו לב כי פיגמנטציה של העור יכולה לאתגר את קביעת MED, עם זאת, אריתמה ובצקת עדיין ניתן להעריך באופן מדויק באופן כללי, בין היתר הודות לצורה המוגדרת של הצמצמים בקלטת במהלך חשיפה לקרינת UV.

תוצאות

איור 1. מלניזציה הנגרמת על ידי פורסקולין מגנה מפני דלקת בתיווך UV כפי שנקבע על ידי בדיקת מינון אריתמטי מינימלי (MED). (א,ב) מיקום של סרט UV חוסם ומנות UVB של בעלי חיים שטופלו פעמיים ביום במשך 5 ימים (A,C) או פעם ביום במשך 15 ימים (B,D,E) עם רכב או פורסקולין. הטיפול המקומי האחרון הוחל 48 שעות לפני ההקרנה. העור הגבי נחשף למינונים שונים של UVB על ידי שימוש בסרט UV-occlu...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
קסילזין	הזרקת אנאסד	LA04612	שננדואה, איווה, ארה"ב
קטמין הידרוכלוריד, USP (הפרמקופיאה האמריקאית)	פאטני	נד"ק 26637-411-01	סנט ג'וזף, מיזורי, ארה"ב (ארצות הברית)
אתנול	מעבדות דקון.	2705
קרם אפילציה, נאיר	צ'רץ' דווייט	JF-11 4381322	פראיסטון, ניו ג'רזי
מנורת Hg Germicidal UV-B	ווסטינגהאוס	F15T8UV-ב
רדיומטר פוטומטר	אור בינלאומי	1LT400A	פיבודי, מסצ'וסטס, ארה"ב (ארצות הברית)
איזותזיה, איזופלורן , USP	באטלר שיין	NCD 11695-6776-1	דבלין, אוהיו, ארה"ב (ארצות הברית)
כרומטר	קוניקה מינולטה	CR-400	רמזי, ניו ג'רזי, ארה"ב (ארצות הברית)
מעבד נתונים עבור Chromameter CR-400	קוניקה מינולטה	DR-400	רמזי, ניו ג'רזי, ארה"ב (ארצות הברית)