$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.
- הכנת מזרק המיקרו-הזרקה והמיקרו-מזרק להזרקה:
- נעל כל מזרק מיקרו-הזרקה אטום לגז במדף של משאבת המיקרו-הזרקה.
- הנח את קצה המזרק האטום לגז לתוך המים הסטריליים הכלולים בסירת משקל קטנה ורפרף בעדינות את הבוכנה כדי לשמן את החוט הפנימי. משוך באופן שווה את הבוכנה אל המעצור האחורי במשאבה כדי למלא אותה במים.
- החלק את צינור PE20 המחובר למיקרו-מזרק על מחט 26 גרם (רכזת חומה) המחוברת למזרק של 1 מ"ל המלא במים סטריליים. רססו מים סטריליים דרך המיקרו-מזרק, ובדקו את דפוס הריסוס והמרחק.
הערה: מים צריכים להתיז רחוק מאוד וישר מקצה המיקרו-מזרק. אם הזרם אינו ישר, מיקום ההזרקה לא יהיה נכון. - הנח את המיקרו-מזרק המעוקר על שדה סטרילי.
- החלק את הצינור מהמחט, תוך שמירה על צינור המיקרו-מזרק זקוף כדי למנוע טפטוף מים החוצה תוך חיתוך הצינור מתחת לאזור שנפגע מהמחט.
- דחוף את בוכנת מזרק המיקרו-הזרקה מעט קדימה כדי ליצור טיפה בקצה המחט והחלק את צינור ה-PE20 המלא במים (המחובר למיקרו-מזרק) על המחט.
הערה: זה ייצור חיבור נוזל לנוזל שיאפשר לחץ אחורי מתאים שעלול לעקור סתימה שעלולה להיווצר בקצה המיקרו-מזרק. - דחוף את הבוכנה לחלוטין קדימה כדי להתכונן לטעינת הדגימה ולהבטיח שלא יישאר עקבות אתנול במיקרו-מזרק.
- בדוק את ההתקנה לאיתור נזילות על ידי נגיעה בטיפת המים שנוצרה בקצה המזרק למגבון מעבדה נקי מספר פעמים.
- הערה: כאשר נוגעים במגבון המעבדה, אמורה להיווצר רק נקודה רטובה אחת. אם יש טיפות נוספות, יש נזילה במערכת.
- הימנע מדליפות על ידי שליטה ביישום דבק סופר ועל ידי חיתוך צינור PE20 במספריים חדים או סכין גילוח בכל פעם שצינור PE20 מוסר מכל חיבור.
- משוך את בוכנת המזרק לאחור 0.2 מיקרוליטר; צור בועה בין המים הסטריליים בצינור/מיקרו-מזרק PE20 לתמיסה שיש להזריק.
- הערה: בועה זו מונעת דילול של ההזרקה, זיהום המים ומאפשרת מעקב אחר תהליך ההזרקה מכיוון שהוא ינוע במהלך ההזרקה. יש לייצר בועה אחת ומוצקה.
- הנח את המיקרו-מזרק לתוך המגיב להזרקה ומשוך לאט את בוכנת המזרק אל הגב
.- הכנת בעל חיים להזרקה:
- החזק את חזה החולדה כנגד חזהו של הנסיין. נקו את האזור סביב הצינורית בעזרת מוליך כותנה ספוג באתנול 70% (v/v).
- הערה: עם טיפול נכון, ניתן לרסן עכברים בעדינות ביד מכוסה. אחרת, ייתכן שיידרש קשקוש.
- הסר אובטורטורים באמצעות מלקחיים קטנים והנח אותם בסירת השקילה עם 70% אתנול (v/v).
- ביצוע זריקות:
- הנח את המיקרו-מזרק המלא לתוך הצינורית. לחץ על התחל במשאבת המיקרו-הזרקה ועקוב אחר תנועת הבועה.
- הערה: ייתכן שיהיה צורך להפעיל לחץ קל כדי להבטיח שהמיקרו-מזרקים לא יתרוממו. הבועה צריכה להתקדם באופן אחיד ולהיכנס במלואה לתוך המיקרו-מזרק.
- הסר את המיקרו-מזרקים מהצינורית והחלף אובטורטורים, לאחר השלמת ההזרקה וחלפה תקופת הדיפוזיה שלאחר ההזרקה.
- הערה: זמני דיפוזיה אופייניים לאחר ההזרקה הם 2 - 4 דקות עבור ריאגנטים פרמקולוגיים ו-2 - 10 דקות עבור וירוסים. השארת המיקרו-מזרק בפנים במהלך התקופה שלאחר העירוי מונעת מהזריקה לחזור במעלה הצינורית במקום להתפזר לתוך הרקמה. הנח אובטורטורים בצד סירת השקילה המלאה באתנול כדי לאפשר לאתנול להתנקז לפני הכנסתו מחדש לצינורית.