השפעות של גירוי מוחי עמוק על פעילות עצבית בהיפוקמפוס במודל חולדה

תקציר

מקור: Selvakumar, T., et al., ניתוח של שינויים בביטוי גנים בהיפוקמפוס של חולדה לאחר גירוי מוחי עמוק של הגרעין התלמי הקדמי. J. Vis. Exp. (2015)

סרטון זה מדגים את ההליך להשתלת אלקטרודות במוח החולדה כדי להפעיל גירוי מוחי עמוק (DBS), המווסת את הפעילות העצבית ומשפר את התקשורת עם ההיפוקמפוס, ותומך בהישרדות עצבית ובנוירוגנזה.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. ניתוח גירוי מוחי עמוק (DBS)

1. הזריק את תערובת הקטמין/קסילזין תוך צפקית לבעל החיים ואשר שהוא הגיע למישור כירורגי של הרדמה (על ידי בדיקת רפלקס צביטת הבוהן, עומק קצב הנשימה וסדירות הנשימה). הסר שיער מאזור הקרקפת שייחתך וחטא את הקרקפת עם שלושה קרצוף לסירוגין, כל אחד של בטדין ואלכוהול או מי מלח סטריליים. אבטח ומקם את החיה על המסגרת הסטריאוטקטית.
2. השתמש ברפידות מים חמים במחזור כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של החיה ברמה אופטימלית. יש למרוח חומר סיכה לעיניים כדי להגן על עיני החיה מפני ייבוש יתר.
3. השתמש בקואורדינטות הסטריאוטקטיות הבאות כדי להתמקד ב-ATN (גרעין התלמי הקדמי): אנטריו-אחורי -1.6 מ"מ, מדיולטרלי 1.5 מ"מ וגב-וונטרלי 5.2 מ"מ. בצע חתך בקרקפת באופן סגיטלי כדי לחשוף את הגולגולת. בעזרת זוג מחזירים, אבטח את הקרקפת החתוכה כדי לחשוף את הגולגולת. השתמש במי מלח סטריליים כדי לשטוף את החתך. אם החתך רטוב מדי, השתמש בצמר גפן סטרילי כדי לייבש אותו. אתר את הברגמה וסמן אותה בטוש שחור. כדי להנחות את מיקום חורי הקוצים, בצע שני סימנים נוספים בכ-1.5 מ"מ בינונית משני הצדדים מהתפר הסגיטלי ו-1.6 מ"מ אחורי לתפר העטרה.
4. השתמש במקדחה ידנית כדי ליצור את חורי הקוצים. ודא שקצה חור הבור סטרילי על ידי עיקורו באתנול. החזק את המקדחה בזווית של כ-45 מעלות למשטח הגולגולת בעת הקידוח. החלף לעתים קרובות בין שני חורי הקוצים כדי למנוע חום מוגזם במיקום של כל חור קוצים.
5. המשך לקדוח עד לחשיפת הדורה בעזרת מחט עם קצה כפוף הדומה לצורת 'L', הסר כל פיסת עצם שבורה שתחסום את החדרת האלקטרודה. הקפד להימנע מפגיעה בדורה ו/או ברקמת המוח הבסיסית תוך הסרת שברי עצם באמצעות המחט הכפופה.
   הערה: שימוש במחט קהה או מלקחיים קהים עדינים הוא גם אופציה.
6. קבע את מכלול האלקטרודה הכפולה לידית המסתובבת של המסגרת הסטריאוטקטית וקבע את הידית בזווית של 90°. בעזרת ההתאמות במסגרת הסטריאוטקטית, מקם את האלקטרודה השמאלית בדיוק מעל הברגמה.
7. באמצעות ההתאמות הסטריאוטקטיות למיקום מדיולטרלי, הזז במדויק את האלקטרודה השמאלית 1.5 מ"מ לצד שמאל של הברגמה כך שכעת יש שתי אלקטרודות מיושרות בצורה מושלמת לאורך התפר העטרתי אך מרוחקות זו מזו 1.5 מ"מ מדיולטרלית מהברגמה.
8. באמצעות ההתאמות הסטריאוטקטיות האנטרופוסטריות, הזיזו את האלקטרודות 1.6 מ"מ אחורה לתפר העטרה.
9. השתמש בהתאמות הגב-וונטרליות כדי להוריד את האלקטרודות כדי לבדוק תחילה אם חורי הקוצים נעשו במיקום הנכון כך שניתן להכניס את האלקטרודות בקלות, מבלי לגעת בקצוות המחוספסים של חורי הקוצים. אם כן, הכנס את האלקטרודות לעומק של 5.2 מ"מ מפני הגולגולת.
10. חבר את האלקטרודות באמצעות מוליכים לסטימולטור המוגדר ברוחב דופק של 130 הרץ, 2.5 וולט ו-90 מיקרו-שנייה.
11. ספק גירוי בתדירות גבוהה למשך שעה (או לפרק זמן רצוי לפי הגדרת הניסוי). במהלך הסימולציה, זכור להקפיד על עומק הרדמה תקין באופן קבוע על ידי בדיקת היעדר נסיגה של כף הרגל בתגובה לצביטה בבוהן. השלמת הרדמה עם כמחצית מהמינון הראשוני המשמש להשראת הרדמה. הימנע מזיהום הכפפות הסטריליות שלך בעת בדיקת עומק ההרדמה, והחלף אותן במידת הצורך. בצע גירוי חד צדדי או דו-צדדי על סמך צרכי הניסוי של האדם. כלול בקרות כגון גירוי בתדר נמוך (למשל, 10 הרץ) ובעלי חיים ללא גירוי (החדרת אלקטרודות ללא גירוי לאחר מכן).

חומרים