מתן תרופות עיניים לנוירומודולציה לא פולשנית במודל עכבר

תקציר

מקור: Zhan, J., et al. אסטרטגיות לא פולשניות למניפולציה כרונית של פעילות עצבית מבוקרת DREADD. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים שיטת מתן תרופות עיניים לא פולשנית לנוירומודולציה ממוקדת. התרופה מועברת באמצעות טיפות עיניים, נספגת במחזור הדם, חוצה את מחסום הדם-מוח ומפעילה קולטנים עצביים ספציפיים.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. מתן חוזר ונשנה של קלוזפין-N-oxide (CNO) באמצעות טיפות עיניים

1. אקלם את בעלי החיים לטיפול על ידי קשקוש כל עכבר 3 דקות ביום במשך 3-4 ימים לפני מתן טיפות עיניים.
2. ממיסים קלוזפין-N-אוקסיד (CNO, 5 מ"ג) ב-1 מ"ל של תמיסת מלח סטרילית של 0.9% (תמיסת מלאי: 5 מ"ג CNO/mL). יש לשמור את התמיסה בקירור בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
3. שקלו כל עכבר לפני תחילת הניסוי כדי לקבוע את כמות ה-CNO שתימסר. השתמש בטיפה של 1-3 מיקרוליטר (לכל עין) כדי להשיג 1.0 מ"ג CNO/ק"ג משקל גוף.
   הערה: כדוגמה, עכבר במשקל 20 גרם צריך לקבל טיפות עיניים דו-צדדיות (2 מיקרוליטר כל אחת).
4. העבירו את טיפות העיניים במהלך השלב הלא פעיל (הקל) של עכברים, שעתיים לפני כיבוי האורות (זמן צייטגבר (ZT) 10). במקרים בהם יש צורך לספק CNO במהלך השלב הפעיל (החשוך) של עכברים, ודא נוכחות של אור אדום עמום לטיפול נכון בבעלי חיים.
   הערה: יש לנקוט באמצעי זהירות כדי למנוע שיבוש המחזור הביולוגי (ובהיר/כהה) של חיות ניסוי.
   1. בעזרת מיקרופיפטה P10, טען את הכמות הנדרשת (1-3 מיקרוליטר) של תמיסת CNO כדי להשיג 1.0 מ"ג CNO/kg.
      הערה: השתמש בקצה פיפטה חדש וסטרילי עבור כל טיפת עיניים. בסדרת ניסויים זו בוצעו טיפות עיניים דו-צדדיות של CNO; עם זאת, אם נדרש ריכוז CNO נמוך יותר, ניתן למרוח גם טיפות עיניים חד צדדיות.
   2. שתק את העכבר באמצעות הקשקוש.
   3. הוציאו את התמיסה באיטיות עד שנוצרת טיפה יציבה על קצה הפיפטה.
   4. קרבו בזהירות את הטיפה לקרנית עין העכבר עד לקבלת התמיסה. קצה הפיפטה לעולם לא אמור לגעת בעין העכבר.
   5. שחרר את העכבר והחזר אותו לכלוב הביתי שלו.
5. חזור על הליך זה כל יום למשך 5 ימים.
   הערה: ניתן להתאים משך זה בהתאם לדרישות הניסוי.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
BSA	Sigma life science	#A2153-100G	אבקת ליופיליזציה ≥96% (אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז)
C57BL/6J עכברים	מעבדת ג'קסון	#000664	עכברים זכרים, נימים בני 3 חודשים
	דראמונד Scientific Company	#3-000-203-G/X	קוטר חיצוני: 1.14 אינץ'.
קלוזאפין-N-אוקסיד	סיגמא	#C0832	5 מ"ג
פוראן	בקסטר	#NDC 10019-360-60	איזופלורן, USP
Microinjector III	Drummond Scientific Company	#3-000-207	Nanoject III - מזרק ננוליטר לתכנות
מדיית הרכבה	Invitrogen	#P36930	Prolong Gold antifade Reagent