מתן תרופות ממוקד במודל עכבר באמצעות הזרקת Cisterna Magna

תקציר

מקור: Zamboni, M., et al., אינדוקציה של שינוי תאי לפטומנינגיאלי באמצעות הזרקה תוך-ציסטרנלית. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים את ההליך של העברת תרופה משרה לבור המים של עכבר מורדם. ההזרקה גורמת באופן סלקטיבי לביטוי סמן פלואורסצנטי בתאי פני המוח הנגישים באמצעות נוזל מוחי שדרתי, שאושר על ידי הדמיה פלואורסצנטית.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. מיקום החיה להליך

1. קבע את ראש החיה על מחזיק הראש. כדי לשפר את הנגישות לבור המים, מקמו את גוף החיה במרחק של כ-30 מעלות מפני השטח של השולחן ואת הראש כלפי מטה, כדי ליצור זווית של 120 מעלות עם שאר הגוף, ולהאריך את החלק האחורי של הצוואר כדי להקל על הגישה לבור המים (איור 1A).
2. הוסף מגבות נייר מתחת לבעל החיים כדי לתמוך בגופו לאורך כל ההליך.
3. הבטח את אספקת ההרדמה דרך הפיה והפחית את ריכוז האיזופלורן ל-2.5% ואת אספקת האוויר ל-200 מ"ל לדקה.
4. יש למרוח משחת עיניים.

2. חשיפת בור המים מגנה

1. לגלח את החלק האחורי של צוואר החיה ולחטא את האזור עם 70% אתנול ובטאדין.
2. בעזרת מספריים כירורגיים יש לבצע חתך בקו האמצע (כ-7 מ"מ אורך) החל מגובה העצם העורפית והארכתה לאחור.
3. יש להפריד בעדינות בין רקמת החיבור השטחית לשרירי הצוואר, ולמשוך הצידה מקו האמצע בעזרת פינצטה עדינה. זה יחשוף את הממברנה הדוראלית המכסה את בור המים, בצורת משולש הפוך.
4. השתמש בחניתות ספיגה סטריליות או צמר גפן כדי לשלוט בכל דימום שנוצר.
5. מקם מפריד כירורגי קטן כדי לשמור על שרירי הצוואר משוכים הצידה ולאפשר הדמיה של בור המים לאורך כל ההליך.

3. הזרקה תוך-ציסטרנית

1. כדי לקבל גישה לבור המים, זהה את הקצה הזנבי של העצם העורפית והכנס את המחט שהייתה כפופה בעבר מיד מתחת.
   הערה: תהיה ירידה פתאומית בהתנגדות כאשר קרום הדוראל מנוקב. עם זאת, קצה המחט יחדור רק מעט מתחת למשטח קרום המוח, הודות לצורתו המכורה.
2. לאחר ניקוב הדורה אפשרו לקצה הכפוף של המחט לחדור מתחת למשטח הדוראלי על ידי משיכה עדינה של המזרק כלפי מעלה ובמקביל לגוף החיה, על מנת "לחבר" את המחט לגולגולת (ראו איור 1B). זה יבטיח יציבות טובה יותר וימנע מהמחט לחדור עמוק יותר, ובכך למנוע את הסיכון לפגיעה במוח הקטן או במדולה הבסיסית.
3. הזריק את התרכובת לאט כדי למנוע הפרעה לזרימה הטבעית של נוזל השדרה.
   הערה: בהתאם למטרת הניסוי, קצב העירוי עשוי להשתנות. אם נדרש קצב עירוי איטי ויציב (למשל, בעת שימוש בהליך למעקב אחר תנועת נוזל השדרה), ייתכן שיהיה מומלץ להשתמש במערכת מיקרו-עירוי אוטומטית בשילוב עם המזרק.
4. לאחר ההזרקה, הניחו למחט לנוח במקום למשך דקה אחת והסירו אותה בזהירות. השתמש במלקחיים בעלי קצה דק כדי לסייע בנסיגת המחט ממקומה המחובר.
   הערה: השימוש במחט דקה (למשל, 30 גרם) אינו מוביל לנזק משמעותי לקרום המוח וכתוצאה מכך ליציאת נוזל השדרה. אם נדרשים גדלי מחט גדולים יותר, אנו ממליצים להפסיק את דליפת הנוזל על ידי הפעלת לחץ במקום ההזרקה באמצעות קצה כותנה סטרילי.

תוצאות

איור 1: תיוג ספציפי של תאים לפטומנינגאליים באמצעות הזרקה תוך-ציסטרנלית של אנדוקסיפן לוחות A ו-B ממחישים את ההליך שפותח למתן תוך ציסטרנלי. על מנת לקבל גישה לבור המים, יש למתוח את החלק האחורי של הצוואר. החיה ה...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
יחידת הרדמה	Univentor 410	8323102	השלמה של וופורייזר, תא וצינורות המתחברים לתא ולמחזיק ראש עכבר
הרדמה (איזופלורן)	בקסטר מדיקל AB	890
בטדין	סיגמא-אולדריץ'	PVP1
אנדוקסיפן	סיגמא-אולדריץ'	E8284
אתנול 70%	היסטולאב	1370
מזרק המילטון (מחט משופעת 30G)	המילטון	80300
מחזיק ראש עכבר	Narishige International	SGM-4	עם פיה לאנסטטיקה באינהלציה. לחלופין, השתמש במסגרת סטריאוטקטית
מספריים	Fine Science Tools	15009-08
מכונת גילוח	Aesculap	GT420
חניתות ספיגה סטריליות	Fine Science Tools	18105-01	צמר גפן סטרילי הם גם אופציה טובה
מפריד כירורגי	מכשיר דיוק עולמי	501897
פינצטה	דומונט	11251-35