מתן תוך ורידי של ננו-חלקיקים טיפוליים במודל גליובלסטומה של עכברים

תקציר

מקור: Kim, B. D., et al. אספקת ננו-חלקיקים של מטען אוליגונוקלאוטיד במודל בעלי חיים מולטיפורמה גליובלסטומה J. Vis. Exp. (2024)

סרטון זה מדגים הזרקה תוך ורידית של ננו-חלקיקים טיפוליים בעכבר נושא גליובלסטומה. השיטה מאפשרת העברה ממוקדת על פני מחסום הדם-מוח ותומכת בהדמיה לא פולשנית להערכת התפלגות ביולוגית של ננו-חלקיקים ויעילות טיפולית בגידולי מוח.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. מתן MN-anti-miR10b

הערה: במחקר זה, ההזרקות נעשו פעם בשבוע למשך 6 שבועות החל מ-7 ימים לאחר ההשתלה, אך ניתן להשתמש באותו פרוטוקול לתדרי הזרקה שונים.

1. שקלו את העכבר וחשבו את נפח ה-MN (ננו-חלקיק מגנטי)-anti-miR10b למתן לעכבר. מינונים של MN-anti-miR10b ניתנים במינון של 20 מ"ג Fe (ברזל) לק"ג במודלים של GBM (גליובלסטומה מולטיפורמה) של עכברים. לדוגמה, עכבר במשקל 20 גרם מקבל מינון של 80 מיקרוליטר של 5 מ"ג Fe/mL MN-anti-miR10b. עכברי ביקורת מקבלים נפח שווה של PBS (מי מלח חוצץ פוספט) התואם את תוכנית המינון הזו.
2. הכן מזרק 28G במינון MN-anti-miR10b וודא שאין בועות בתמיסת ההזרקה.
3. להרדים את העכבר תחת 2%-4% איזופלורן לאינדוקציה ו-1.5%-2% לתחזוקה עם קצב זרימה של 1.5 ליטר לדקה בקופסת אינדוקציה. העבר את העכבר לקונוס אף והמשך במתן הרדמה. בדקו את עומק ההרדמה ומרחו משחה וטרינרית.
4. עקרו את הזנב עם מגבון איזופרופנול של 70% והניחו לעודפי אלכוהול להתייבש.
5. סובב את הזנב כדי למקם את הוורידים הזנביים הצדדיים בחלק העליון של הזנב. לאחר מכן, מכוון לווריד, הכנס את המחט לזנב וצור ואקום על ידי משיכת הבוכנה לאחור.
6. הכנס את המחט עד שדם נכנס למזרק, מה שמעיד על כניסה מוצלחת לווריד.
7. יש להזריק לאט MN-anti-miR10b ולהחזיר את המחט לאחר לידה מלאה. הפעל לחץ על מקום ההזרקה בעזרת גזה עד להפסקת הדימום.
8. הסר את העכבר מחרוט האף. עקוב אחר העכבר עד להחלמה מלאה ואמבולטורי.
   הערה: מתן בולוס של ננו-חלקיקים עלול לגרום למצוקה נשימתית. עקוב בזהירות אחר העכבר והחל מיד לחיצות חזה קלות אם יש סימנים למצוקה נשימתית.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Athymic nude "J:NU" עכברי	מעבדת ג'קסון	RRID:IMSR_JAX:007850	דגם עכבר מדוכא חיסון
70% איזופרופואיל אלכוהול מגבון	קרדינל	MW-APL	מגבון חיטוי מקומי להשתלת גידול והזרקת וריד זנב
Isoflurane	Covetrus	11695067772	Anethesia
Isoflurane וופורייזר	SOMNI Scientific	VS6002	מכשיר הרדמה
מזרק אינסולין 1CC 29G X 1/2 אינץ'	Becton, Dickinson	324704	מזרק להזרקת D-לוציפרין והזרקת וריד זנב של ננו-חלקיקים