כימות נפילת חיידקים להערכת פוטנציאל ההעברה בזיהום בדרוזופילה

תקציר

מקור: Siva-Jothy, J. A., ואחרים, זיהום חיידקי דרך הפה ונשירת שיער ב-Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)

הסרטון הזה מדגים את ההליך למעקב אחר נפילת חיידקים בדרוזופילה על ידי העברת זבוב נגוע דרך מספר צינורות מכילות מזון, חילוץ חיידקים שנשרו וכימות מושבות חיוניות באמצעות דילול ושריון סדרתיים.

פרוטוקול

1. מדד נזירת חיידקים
   1. מדוד את הנשירה לצד העומס הפנימי.
   2. לאחר ההדבקה, העבר זבובים בודדים לצינורות מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל המכילים ~50 מיקרוליטר של מדיום לואיס למשך 24 שעות.
   3. הסר את הזבובים למדידת העומס הפנימי ושוטף את הצינורות ב-100 מיקרוליטר של 1x PBS (מלח עם בופר פוספט) על ידי מערבולת כבדה במשך 3 שניות.
   4. מדוד את יחידות ה-CFU (יחידות יוצרות מושבה) בשטיפה זו על ידי ציפוי על אגר מזין LB (Luria-Bertani).
   5. לאחר ההדבקה, העבר זבובים בודדים לצינורות מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל המכילים ~50 מיקרוליטר של מדיום לואיס למשך 24 שעות.
   6. העבר את הזבובים לצינורות מיקרוצנטריפוגות חדשים המכילים ~50 מיקרוליטר של מדיום לואיס לעוד 24 שעות. שטוף את הצינורות המזוהמים ב-100 מיקרוליטר של 1x PBS על ידי מערבולת כבדה במשך 3 שניות.
   7. מדוד את ה-CFU בשטיפה הזו על ידי ציפוי על אגר נוטריינט LB.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
בקבוקונים	סארסטדט בע"מ	58.49	צינור פוליסטירן שטוח בגודל 75 מ"מ על 23.5 מ"מ, 23 מ"ל
אגר	סיגמא-אלדריץ'	A7002	אגר, אפר 2.0-4.5%
סוכר חום	בידבסט	66032	חום בהיר, סוכר רך
תירס	חוות דאב		קמח תירס אורגני
שמרי פרמיפאן	בידבסט	96360	שמרים יבשים ומיידיים
צלחות פטרי	פישר סיינטיפיק בריטניה בע"מ	15788517	צלחת פטרי X600 בגודל 90 x 16.2 מ"מ מערכת אוורור משולשת סטרילית
צינור אפנדורף (1.5 מ"ל)	סארסטדט בע"מ	72.690.001	Sarstedt Micro Tube עם בסיס קוני עם פקק דחיפה 1.5ml נייטרל סטנדרטי
אתנול	VWR International Ltd.	20821.33	ETHANOL ABSOLUTE ANALAR NP ACS/R.PE - דרגה אנליטית
ליין-באק, מילר	פישר סיינטיפיק בריטניה בע"מ	BP1426	מכיל 10 גרם טריפטון, 5 גרם תמצית שמרים, 10 גרם נתרן כלוריד לליטר
מיקרופלטה עם 96 בארות	ציוד מעבדה מדעית בע"מ.	353072	פלקון 96 לוחית מיקרופלטה של תרבית תאי פוליסטירן שטופלה ב-TC עם כיסוי סטרילי
מערבולת	פישרברנד		מערבולת 75W 50-6-Hz 220-240V
קצות פיפט של 10 מיקרוליטר	גריינר ביו-וואן בע"מ	741015	בסגנון איזלילוד גילסון. סיימתי, נקי, מילוי, 960 יחידות
קצות פיפט בנפח 200 מיקרוליטר	גריינר ביו-וואן בע"מ	741065	בסגנון איזלילוד גילסון. סיימתי, נקי, מילוי, 960 יחידות
קצות פיפטה 1000 מיקרוליטר	גריינר ביו-וואן בע"מ	741045	בסגנון איזלילוד גילסון. סיימתי, נקי, מילוי, 960 יחידות
קצות פיפטה מסוננים בנפח 20 מיקרוליטר	גריינר ביו-וואן בע"מ	774288	קצה פילטר בסגנון גילסון. Clear, Rack Blue, Single Packed, ללא R/Dnase, 10 מדפים של 96 יחידות
קצה פיפטה מסוננת בנפח 200 מיקרוליטר	גריינר ביו-וואן בע"מ	739288	קצה פילטר בסגנון גילסון. Clear, Rack Blue, Single Packed, ללא R/Dnase, 10 מדפים של 96 יחידות
1000 מיקרוליטר קצות פיפטה מסוננות	גריינר ביו-וואן בע"מ	740288	קצה פילטר בסגנון גילסון. Clear, Rack Blue, Single Packed, ללא R/Dnase, 10 מדפים של 60 חלקים