$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.
1. חיסון ב-Pseudomonas aeruginosa
- דילל תרבית PAO1:lux בלילה ל-OD600 = 0.05 ב-75 מ"ל של מדיום Lysogeny Broth (LB) המכיל 100 מיקרוגרם/מ"ל קרבניצילין וגדל את החיידקים עד שהתרבית בשלב האקספוננציאלי המוקדם (OD600≈0.3). זה אמור לקחת בערך 2–3 שעות.
- דילל PAO1:lux במי מלח מפוספט (PBS) לריכוז של (7.5 ± 2.5) x 102 CFU/mL. ודאו שאתם מכינים עודף חיסון כדי להבטיח נפח מספק ולאפשר את הצילוי לאחר הניסוי. אם אתה מוביל בין מתקנים, השתמש בכליאה כפולה בקופסה חסינה לדליפות המסומנת בבירור Biohazard.
- בצע את כל העבודה עם P. aeruginosa ועכברים באמצעות ציוד מגן אישי מאושר בארון בטיחות ביולוגית (BSC) מאושר ברמת בטיחות ביולוגית לבעלי חיים ברמה 2 (ABSL-2). ציוד רב-פעמי כמו משקל משקל צריך להיות מכוסה בניילון נצמד כדי למנוע זיהום.
- הרדימו את העכבר באמצעות איזופלורן של 3%. שקלו את העכבר ורשמו את המשקל. הזרקו לעכבר תת-עורית נתרן כלוריד 0.9% סטרילי מחומם מראש, 250 מיקרוליטר בכל צד, לסך כולל של 500 מיקרוליטר.
- אם הסרט השקוף של העכבר הוסר במהלך הלילה, הסר בזהירות כל גלד שנוצר והניח תחבושת חדשה.
- השתמש במזרק בטיחות טוברקולין 27 גרם בנפח 500 מיקרולטר כדי להזריק 40 מיקרוליטר של מתליית PAO1:lux דרך תחבושת הסרט השקוף לכל פצע. יש להשתמש בעכברים שונים לבקרת פצעים לא מחוסנים/PBS כדי למנוע זיהום צולב מהצד הנגדי.
- החזר את העכבר לכלוב שלו על כרית חימום ומוניטור עד שיתעורר. כל העכברים צריכים להיות מאוחסנים בכלובים נפרדים כדי למנוע זיהום צולב.
- הספקו משחת תוספי תזונה עתירת קלוריות בין כדורי מזון על רצפת הכלוב.