מבחן קו-אינפלטרציה לבדיקת אפקטורים פתוגנים המדכאים השתקת RNA בצמח

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: שי, ג'. ואחרים. סינון וזיהוי מדכאי השתקת RNA מאפקטורים מופרשים של פתוגנים צמחיים. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים מבחן חדירה משותפת לזיהוי חלבוני אפקטור פתוגנים המדכאים השתקת RNA בניקוטיאנה בנתמיאנה 16c. דיווח פלואורסצנטי וגן אפקטור מועמד מועברים לעלי הצמח דרך אגרובקטריום. בדרך כלל, השתקת RNA מפחיתה את תמלולי המדווחים, ומפחית את הפלואורסצנציה. אפקטורים מדכאים חוסמים תגובה זו, ושומרים על פלואורסצנציה. בדיקה זו מציעה שיטה מהירה ויזואלית לסינון אפקטורים מיקרוביאליים שמפריעים להגנת המארח.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חדירה משותפת ניקוטיאנה בנתמיאןא עלים

ערבב נפחים שווים של תרבית אגרובקטריה המכילה 35S-GFP עם תרבית אגרובקטריה המכילה 35S- מדכא וירוס פסיפס מלפפון 2b (CMV2b), אפקטור משוער, או וקטור ריק (EV).
חדרו בזהירות ובאיטיות את תסמיני האגרובקטרים המעורבים בצדדים האפקסיאליים של עלי N. benthamiana 16c באמצעות מזרק ללא מחטים בנפח 1 מ"ל.
הסר את שארית ההתנגדות החיידקית מהעלים עם מגבים לרקמות רכות והקיף את שולי הכתמים החדרו עם עט יצרן.
השאירו את הצמחים החדרו בתא הצמיחה באותם תנאי גדילה.

הערה: מטעמי בטיחות ובריאות, יש ללבוש משקפי מגן ומסכה בזמן החדירה. כדי למנוע זיהום צולב, יש להחליף כפפות או לחטא אותן באתנול בין החדירות. בדרך כלל נדרש לפחות 1 מ"ל של תסמיני אגרובקטריה לכל עלה לחדירה לחדירה. להשתקה מערכתית, יידרשו לפחות שני עלים לחדירת המים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם

חברה

מספר קטלוג

הערות

מנורת UV

אנליטיק ינה

UVP B-100AP

תצפית

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

מאמרים קשורים