בידוד חיידקים מהמעי הבינוני של היתוש

תקציר

מקור: ליו, X. ואחרים. בדיקת האכלה חיידקית דרך הפה עם יתושים שטופלו באנטיביוטיקה. J. Vis. Exp. (2020)

הסרטון הזה מדגים את ניתוח המעי האמצעי של היתושים כדי לבודד חיידקי מעיים. המעי האמצעי מופק ממערכת העיכול, עובר הומוגני לשחרור החיידקים, ומוצף על אגר נוטריינט לתרבית מושבות חיידקים.

פרוטוקול

1. נתח את מערכת העיכול של יתוש
   1. העבר את היתוש המעוקר על פני השטח אל מחסנית הזכוכית עם טיפה של בופר מלח (PBS) סטרילי 1x פוספט-בופר. נתח תחת מיקרוסקופ הניתוח.
   2. בהגדלה הנמוכה של מיקרוסקופ הניתוח, הסר בזהירות את רגליו, כנפיו וראשו של היתוש כדי למנוע בריחה. הסר את הסומיט האחרון של היתוש על ידי חיתוך ישיר, במקום למשוך אותו, כדי למנוע את שבירת מערכת העיכול.
   3. מהדק את החזה של היתוש ואת קצה הבטן עם מלקחיים. משוך בעדינות את מערכת העיכול של היתוש. מערכת העיכול הנרכשת בדרך כלל מכילה את הגידול, הקדמי, המעי המרכזי, המעי האחורי וצינורות המלפיגי.
   4. כוון את מיקרוסקופ הניתוח להגדלה גבוהה יותר. הסר את היבול, המעי הקדמי, המעי האחורי וצינורות המלפיגיאן ממערכת העיכול המנותחת כדי לקבל את המעי האמצעי של היתוש.
   5. היזהרו בעת הסרת היבול, שכן הגידול מתנפח ומזכיר את המעי האמצעי לאחר שהיתוש אוכל קח סוכר. צינורות המלפיגי, קבוצת צינורות הפרשה ארוכים ודקים, ממוקמים בגבול שבין המעי האמצעי למעי האחורי.
2. בידוד חיידקי מעיים
   1. העבר את מערכת העיכול המנותקת לצינור סטרילי בנפח 1.5 מ"ל עם 200 מיקרוליטר של בופר PBS סטרילי 1x.
   2. טחנו את המעי האמצעי על ספסל סטרילי היטב עם עלי סטרילי כדי לאפשר שחרור מלא של חיידקי המעי אל הבופר.
   3. מדלל סדרתי את ההומוגנט לשלוש דילול של 10 פעמים. הוסיפו 50 מיקרוליטר מכל דילול לצלחת האגר של LB (ציר לוריה) ומרחו אותה על הצלחת. אם המעי האמצעי מכיל ריכוז גבוה של פלורה במעיים, חשוב לבצע יותר דילול סדרתי כדי לזהות מושבות בודדות.
   4. דגרו את הצלחת בטמפרטורה של 37°C למשך 1–2 ימים עד שמושבות בודדות נראות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אדס מצרים			יתושים נקבות
צינור צנטריפוגה	סאנגון ביוטק	F601620-0010	1.5 מ"ל, טבעי, בוגר, סטרילי
עלי לטחינת רקמות חד-פעמיות	סאנגון ביוטק	F619072-0001	70 מ"מ אורך, קוני, כחול, סטרילי
מלקחיים	הנעה אחורית	F11029	ניתוח
אבקת אגר LB	סאנגון ביוטק	A507003	טריפטון 10.0 גרם, תמצית שמרים 5.0 גרם, NaCl 10.0 גרם, אגר 15.0 גרם.
מיקרוסקופ	צייס	Stemi508
10X PBS buffer	סאנגון ביוטק	E607016	המוצר הזה הוא פתרון של 10X. אנא דילל אותו 10 פעמים לפני השימוש. ערך ה-pH הוא 7.4.