מידול זיהום בעכברים יילודים באמצעות חיידקים ביולומינסנטיים עטופים

תקציר

מקור: Seman, B. G. ואחרים. מודל הדמיה של יילודים של ספסיס חיידקי גראם שלילי. J. Vis. Exp. (2020)

הסרטון מדגים מודל עכבר יילוד לחקר זיהום מערכתית באמצעות חיידקים ביולומינצנטיים מקופלים. גורים יילודים מוזרקים בתרופות חיידקיות במינון גבוה או נמוך ומוחזרים לאמם לטיפול לאחר הלידה. החיידקים המכוסים בכיסוי נמנעים מזיהוי חיסוני מוקדם, מתפשטים באופן מערכתית, ומוצגים לאורך זמן באמצעות הדמיית זוהר. מודל זה מאפשר מעקב לא פולשני אחר התקדמות הזיהום בעכברים יילודים.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הכנת חיסון חיידקי

1. רצף פלטת אגר סויה טריפטית (TSA) עם לולאת חיסון לבידוד מושבה בודדת ממלאי מקפיא של Escherichia coli O1:K1:H7-lux , שמבטא לוסיפראז באופן יציב ונושא עמידות לקאנאמיצין. דגרו במהלך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
2. למחרת, אפשר למרק לוריה (LB) להגיע לטמפרטורת החדר (25 מעלות צלזיוס) בארון בטיחות ביולוגית.
3. מתחת למכסה ארון בטיחות ביולוגית, יש לזהות מושבה אחת מהפלטה המפוספסת ולהחסין אותה ב-3 מ"ל LB בתוספת קאנמיצין (30 מיקרוגרם/מ"ל). דגרו במהלך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם ניעור במהי....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מזרק אינסולין בנפח 1 מ"ל	קוביד	1188128012	הזרקת אינוקולום או PBS
משחת דיו קעקוע של בעלי חיים	קטצ'ום	KI1482039	זיהוי בעלי חיים
משחת קעקוע של בעלי חיים עם דיו ירוק	קטצ'ום	KI1471039	זיהוי בעלי חיים
אשריכיה קולי O1:K1:H7	ATCC	11775
אשריכיה קולי O1:K1:H7-lux (מבטא לוסיפראז)	לא זמין	לא זמין	נבנה פנימית ב-WVU
DPBS, 1X	קורנינג	21-031-CV
דיפקו טריפטיק סוי אגר	בקטון, דיקינסון ושות'	236950	צמיחת חיידקים
תוכנת IVIS Spectrum CT ו-Living Image 4.5	פרקין אלמר	לא זמין	הדמיה תוך-חיונית
LB Broth, לנוקס	פישר ביוריאגנטים	BP1427-500	צמיחת חיידקים