הזרקה תוך-פריטונית של ליפופוליסכריד חיידקי בעכברים לחקר תגובות חיסוניות מערכתיות

תקציר

מקור: רדולוביץ', ק., ואחרים. הזרקות של ליפופוליסכריד לעכברים כדי לחקות כניסת מוצרים שמקורם במיקרוביאליזם לאחר פריצת מחסום מעיים. J. Vis. Exp. (2018)

הסרטון הזה מדגים הליך שלב אחר שלב להזרקת ליפופוליסכריד (LPS) לעכברים תוך-פריטונית כדי לגרום לדלקת מערכתית.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הזרקה תוך-צפונית של ליפופוליסכריד (LPS) לעכברים
   1. שאיפת תמיסת ה-LPS במזרק 0.5 מ"ל עם מחט 30 G בזרימת אוויר למינרית.
   2. שקלו נקבות C57Bl/6 עכברים (בגיל 6 עד 10 שבועות) וחשבו את כמות ה-LPS שתיזרק: 10 מיקרוליטר (2 מיקרוגרם)/גרם משקל גוף.
      הערה: לדוגמה, אם עכבר שוקל 20 גרם, אז יש להזריק תמיסה עובדת של 20 גרם x 10 מיקרוליטר = 200 מיקרוליטר LPS.
   3. תטפלו בעכבר בעדינות אך בנחישות ותחזיקו את החיה ביד אחת. ודא שהחיה מסוגלת לנשום כרגיל אך לא להסתובב ולהתהפך במהלך ההגבלה.
   4. הטה את אף העכבר מעט לכיוון הרצפה כדי לחשוף את הבטן להזרקה. מקם את קו האמצע של הבטן ואת מיקום ההזרקה בבטן התחתונה, שמאלה או ימינה מהקו האמצע. הזרקו תוך-פריטונית (i.p.) סליין עם בופר פוספט (PBS) במקום LPS לעכברי בקרה.
   5. ביד החופשית, הזרקו את הנפח המתאים (הנפח המחושב בשלב 1.2) של תמיסת ה-LPS הפועלת. ודאו שהמחט נכנסה לחלל הפריטונאלי, אחרת עלולות להתרחש הזרקות שגויות לשכבת שריר הבטן. עם זאת, אל תיכנס עמוק מדי עם המחט לחלל הפריטונאלי כדי למנוע פגיעה באיברים הפנימיים שנמצאים באזור זה.
   6. החזירו את החיה בזהירות לכלוב עם עד 5 עכברים בכל כלוב.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
LPS Escherichia coli O111:B4	Invivogen, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב.	TLRL-EBLPS
מזרק אינסולין חד-פעמי Omnican 50	ב. בראון מלזונגן, מלזונגן, גרמניה	9151125