הכנת תרבית סטפילוקוקוס אוראוס המוליטית למחקרי אינטראקציה בין מארח לפתוגן

תקציר

מקור: Behera, R.K. ואחרים, שיטה מבוססת פלואורסצנציה לחקר ויסות גנים חיידקיים ברקמות נגועות. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים את הכנת תרביות המוליטיות של Staphylococcus aureus כדי לתקן את צמיחת החיידקים ולהשיג סינכרון מטבולי למחקרי אינטראקציה בין מארח לפתוגן.

פרוטוקול

1. הכנת חיסון חיידקי
   1. זני Streak Staphylococcus aureus המעניינים לבידוד בלוחות אגר בדם ממאגר גליצרול קפוא. דגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 16–24 שעות כדי לאשר פנוטיפים המוליטיים בהתבסס על יכולתם לפרק תאי דם אדומים (RBC) וליצור אזורים שקופים וברורים.
   2. התחל תרביות לילה על ידי חיסון מושבות בודדות מכל זן ל-4 מ"ל מרק סויה טריפטי (TSB) בצינורות זכוכית סטריליים. סובב את הצינורות ב-37 מעלות צלזיוס למשך 16–24 שעות בגלגלת צינורות בזווית של כ-70° ו-70 סיבובים לדקה (RPM).
   3. השתמשו בספקטרופוטומטר למדידת צפיפות אופטית ב-600 ננומטר (OD₆₀₀) של התרביות משלב 2.1.2. השתמש במדיום סטרילי כהפניה אופטית (ריק). מדלל את התאים_{ל-OD 600} של 0.05 ב-25 מ"ל של ציר טריפטי סטרילי (TSB) בבקבוקי דלונג נפרדים בנפח 125 מ"ל (יחס בקבוק לנפח 5:1) ודוגר תרביות באמבט מים (להעברת חום נכונה לתרביות), נער ב-280 סל"ד ומכוון ל-37 מעלות צלזיוס.
      הערה: גדילת האינוקולום יכולה להתבצע בדרכים שונות; מוצגת שיטה אחת לגידול תאים לשלב מעריכי. בכל מקרה, חשוב להשתמש באותה שיטה באופן עקבי להכנת התאים לחיסון.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
5% דם כבשים	הארדי דיאגנוסטיקס (סנטה מריה, קליפורניה)	A10
אמבט מים מנענע במסלול	ניו ברונסוויק אינובה	NA
ציר סויה טריפטי	VWR	90000-376
ספקטרופוטומטר נראה UV	בקמן קולטר-DU350	NA