Method Article

בידוד וגידול חיידקים מעוברי דגי זברה להערכת עומס זיהום

January 30th, 2026

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: ברנוט, א., ואח', פענוח והדמיה של פתוגנזה ודימות של מיקובקטריום אבססיסוס בעוברי דגי זברה. J. Vis. Exp. (2015).

הסרטון הזה מדגים פרוטוקול לבידוד וכימות של Mycobacterium abscessus מעובר דג זברה נגוע. ההליך כולל המתת חסד של עוברים, ניתוק רקמות והומוגניזציה לשחרור החיידקים, ולאחר מכן צנטריפוגה והשעיה מחדש בבופר סורפקטנטים. לבסוף, ההשעיה החיידקית מדוללת באופן סדרתי, מצופה על אגר עם תוספת אנטיביוטיקה, ומודגרת כדי לאפשר יצירת מושבות וכמות.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. הכנה ואחסון של חוסון M. abscessus
    1. תנאי גדילה של M. abscessus
      1. הוציאו את M. abscessus ממאגר גליצרול -80°C אל אגר מידלברוק 7H10 המכיל 10% OADC ו-0.5% גליצרול (7H10OADc) והוספו לאנטיביוטיקה המתאימה בהתאם לסמן העמידות הנושא הווקטור המקודד את החלבון הפלואורסצנטי. דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס למשך 4-5 ימים.
      2. קחו מושבה מיקרובקטריאלית חיובית בפלואורסצנציה והחסנו 1 מ"ל מרק מידלברוק 7H9 בתוספת OADC, 0.2% גליצרול, 0.05% טווין 80 (7H9OADc/T) עם האנטיביוטיקה הנדרשת בצינור פלסטיק סטרילי של 15 מ"ל. דגרו בטמפרטורה של 30 מעלות צל....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Figure_1.jpg

איור 1. הכנת M . abscessus inocula מפוזר.צביעת Ziehl-Neelsen של וריאנטים של R או S שגודלו על מדיום ציר לפני כל טיפול (פאנלים עליונים) או לאחר טיפול (פאנלים תחתונים) כדי להפחית את גודל ומספר האגרגטים המיקובקטריאל.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
BBL MGIT PANTABD ביוסיינסס245114 
אלבומין סרום בקריורומדקס04-100-811-E 
קטלאז מ-Cowine Liverסיגמא-אלדריץ'C40 
דיפקו מידלברוק 7H10 אגרBD ביוסיינסס262710 
מרק דיפקו מידלברוק 7H9BD ביוסיינסס271310 
מלח מתאנסולפונאט אתיל 3-אמינובנזואט (טריקאין)סיגמא-אלדריץ'A5040 
חומצה אולאיתסיגמא-אלדריץ'O1008 
פאראפורמלדהידמיקרוסקופיית דלתא15710 
פנול אדוםסיגמא-אלדריץ'319244 
טווין 80סיגמא-אלדריץ'P4780 
אגרGibco Life Technologie30391-023 
אגרוז עם התכה נמוכהסיגמא-אלדריץ'  
מלחי ים מיידיים באוקיינוסמערכות אקווריום בע"מ  
נימי זכוכית בורוסיליקטסאטר אינסטרומנט בע"מBF100-78-101 מ"מ O.D. X 0.78 מ"מ זיהוי
מכשיר מושך מיקרופיפטותסאטר אינסטרומנט בע"מ מושך מיקרופיפטות חום p-87
מיקרואינג'קטורטריטק ריסרץ' מיקרו-אינג'קטור דיגיטלי, MINJ-D
פינצטהסיינס טולס בע"מ דומון # M5S
טיפים למיקרולודראפנדורף  

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Zebrafish EmbryoBacterial IsolationTissue HomogenizationSerial DilutionColony FormationAntibiotic ResistanceCFU QuantificationMiddlebrook 7H10Triton X 100Tricaine Anesthesia

Related Articles