מאמר שיטה

מידול פתוגנזה של Aeromonas ב-C. elegans באמצעות מבחן הישרדות

2 בפברואר 2026

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: צ'ן, י. ואחרים. הערכת אלימות ופתוגנזה של זיהום Aeromonas במודל Caenorhabditis elegans . J. Vis. Exp. (2018)

הסרטון הזה מדגים בדיקת הישרדות באמצעות C. elegans למידול פתוגנזה של Aeromonas , שבה בליעת חיידק דרך הפה מובילה לזיהום במעי ולמוות, ומאפשרת הערכה כמותית של אלימות חיידקית במערכת מארחת חיה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. מבחן הישרדות של C. elegans עם Aeromonas

  1. ביום זריעת תולעי L1 על תולעת ENGM (תווך גידול נמטודות מועשר) המתפשטות עם E. coli OP50, בחרו מושבה אחת מכל אחד מארבעת זני Aeromonas או E. coli OP50 ותרבית עם מרק 2 מ"ל LB, בהתאמה, בטמפרטורה של 37°C למשך 16 שעות.
    הערה: כדי למנוע זיהום, שלב זה צריך להתבצע במכסה זרימה למינרי. כאן השתמשו בזני החיידקים הבאים: E. coli OP50, מקור המזון הרגיל של C. elegans. A. dhakensis AAK1, הבידוד הקליני הפתוגנני הראשון עם רצף מלא של A. dhakensis . A. hydrophila A2-066, A. veronii A2-007 ו-A. caviae A2-9307121 הם מבודדים קליניים מייצגים מבית החולים הלאומי צ'נג קונג.
  2. מדדו את ספיגת OD600 (צפיפות אופטית ב-600 ננומטר) של ציר חיידקים והתאימו את ציר החיידקיםל-OD 600 = 2.0 עם ציר LB.
  3. אתר ופיזר 30 מיקרוליטר של מרק חיידקים על כל צלחת NGM (מדיום גידול נמטודות) בקוטר 6 ס"מ. תגדלו את הצלחות בטמפרטורת החדר במהלך הלילה.
    הערה: להכנת NGM, יש להמיס 3 גרם NaCl (כלוריד נתרן), 2.5 גרם פפטון חיידקי ו-20 גרם אגר ב-1 ליטר מים דה-יוניים. אוטוקלאב ב-121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. המתינו עד שהתקררו ל-55 מעלות צלזיוס באמבט מים ואז הוסיפו 1 מ"ל של 1 מ' CaCl2 (כלוריד סידן), 1 מ"ל של 1 מ' MgSO4 (סולפט מגנזיום), 1 מ"ל של 5% כולסטרול באתנול, ו-25 מ"ל בופר פוספט. לסובב כדי לערבב טוב.
  4. ביום שבו תולעי L1 גדלות לשלב L4, בוחרות ומעבירות באקראי 50 תולעים ללוח NGM עם כל אחד מארבעת זני Aeromonas או E. coli OP50.
  5. דגרו את לוחות ה-NGM בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס עד לסיום הבדיקה.
  6. העבר את כל התולעים החיות ללוח NGM חדש שהוכנה עם חיידקים וספר את מספר התולעים החיים, המתות והחיישנים מדי יום עד שהתולעת האחרונה מתה.
    הערה: העבירו תולעים לפלטת NGM טרייה מדי יום לשמירה על זיהום, גם אם משתמשים בתולעים סטריליות (למשל, glp-4 או עם FudR).
  7. צייר את עקומות ההישרדות בהתבסס על חישוב הנתונים היומי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
חממת שייקריי דרLM-570Rדגירה של חיידקים
NaClסיגמה31434הכנת מדיום תרבותי
MgSO₄סיגמהM7506הכנת מדיום תרבותי
אגרדיפקו214530הכנת מדיום תרבותי
CaCl₂סיגמהC1016הכנת מדיום תרבותי
כולסטרולסיגמהC8503הכנת מדיום תרבותי
פלטת פטרי בקוטר 6 ס"מאלפא פלוס46הכנת צלחת אגר
פפטון חיידקיAffymetrix/USBAAJ20048P2הכנת מדיום תרבותי
FudRסיגמה1271008הכנת מדיום תרבותי
מערכת מיקרוסקופניקוןEclipase Ti הפוךהדמיית מיקרוסקופ

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

C elegans

מאמרים קשורים