ביצוע כרומטוגרפיה בשכבה דקה להערכת פירוק אקסופוליסכריד חיידקי

תקציר

מקור: הו, י. ואחרים. ניתוח אינטראקציות בין אנדוביוטיקה למיקרוביום המעי האנושי באמצעות מערכות תסיסה במבחנה. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים את השימוש בכרומטוגרפיה בשכבה דקה (TLC) להערכת פירוק אקסופוליסכרידים (EPS) על ידי מיקרוביום צואה אנושי. קטעי EPS בסופרנטנטים של תסיסה מופרדים לפי גודל וקוטביות באמצעות TLC, ואז מוצגים כרצועות צבעוניות לאחר צביעה ספציפית לפחמימות.

פרוטוקול

1. פירוק אקסופוליסכרידים (EPS) על ידי מיקרוביום צואה אנושי

1. טעינו 0.2 מיקרוליטר של סופרנטנטים מותססים על לוחות אלומיניום שכבה דקה (TLC) מסוג סיליקה ג'ל-60 מצופים מראש, ואז ייבשו באמצעות מייבש שיער.
2. מפתחים את הלוחות בתמיסה של 20 מ"ל חומצה פורמית/n-בוטנול/מים (6:4:1, v:v:v) ומייבשים אותם באמצעות מייבש שיער.
3. השרו את הצלחות במגיב האורצינול לצביעה, ואז ייבשו עם מייבש שיער.
   1. הכינו תגובות אורצינול על ידי המסה של 900 מ״ג ליכנול ב-25 מ״ל מים מזוקקים, ואז הוספת 375 מ״ל אתנול. כתוצאה מכך, יש להוסיף לאט חומצה גופרתית מרוכזת ולערבב את התמיסה היטב.
4. חממו צלחות ב-120 מעלות צלזיוס למשך 3 דקות בתנור אפייה והערכו את התדרדרות ה-EPS על ידי מדידת רצועות TLC.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
תנור לאפייה	חברת שנגחאי ייהנג למכשירים מדעיים בע"מ	DHG-9240A	משתמשים בו לחימום ואפייה
אתנול	סיגמא-אלדריץ'	E7023	לשימוש להכנת ויטמין K1
חומצה פורמית	סיגמא-אלדריץ'	399388	משמש ל-TLC
ליצ'נול	סולרביולוגיה	C8380	שימוש להכנת צלחת צבע
n-בוטנול	ChemSpider	71-36-3	משמש ל-TLC
אורסינול	סיגמא-אלדריץ'	447420	משמש להכנת תגובות אורצינול
חומצה גופרתית	סיגמא-אלדריץ'	150692	משמש להכנת תגובות אורצינול
לוחות אלומיניום TLC	מרקמיליפורה	116835	משמש ל-TLC