דימות טיימלפס בתאי חיים של טורפות בקטריובורוס של Bdellovibrio על E. coli

תקציר

מקור: Makowski, Ł., ואחרים. הדמיה של תאים חיים של טורף חיידקי Bdellovibrio bacteriovorus באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה בזמן-לפס. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים הדמיית פלואורסצנציה בזמן אמת של חיידק בדלוביבריו הטורף E. coli מקובע מתחת לכרית אגרוז, ומאפשר הדמיה בזמן אמת של שכפול תוך-תאי ושחרור צאצאים לצורך חקר טורף חיידקים ואינטראקציות בין מאכסן-פתוגנים.

פרוטוקול

1. הולכת מיקרוסקופיית פלואורסצנציה בזמן-לאפס

1. הנח את הצלחת בקוטר 35 מ"מ במחזיק הצלחות פטרי כך שלא תזוז במהלך הניסוי. מניחים טיפה אחת של שמן טבילה (מקדם שבירה 1.518) על האובייקטיב וגם על תחתית הצלחת בקוטר 35 מ"מ.
2. התקן את המחזיק על הבמה של המיקרוסקופ ההפוך בתא המיקרוסקופ.
3. הגדר את האפשרויות בתוכנת בקרת המיקרוסקופ כדי לאסוף תמונות מרובות במיקומי שלבים שונים לאורך זמן.
   1. הגדר את ההגדלה (100x) ואת העדשה הפוליכרומית (GFP (חלבון פלואורסצנטי ירוק)/mCherry). באמצעות עינית ו-brightfield (BF), מצא את מישור המוקד ופתח את מנהל רשימת הנקודות.
   2. בחר לפחות 10 מיקומים מעניינים על ידי הזזת הבמה ואחסון הקואורדינטות של כל מ....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ביולוגיה מולקולרית מוסמכת אגרוז	ביו-ראד	161-3100	אגרוז פלואורסצנציה נמוכה עבור רפידת אגרוז
פיג'י	ImageJ	https://imagej.net/Fiji	חבילת עיבוד תמונה בקוד פתוח
צלחת תחתית זכוכית 35 מ"מ	איבידי	81218-200	זכוכית לא מצופה
מיקרוסקופ	GE	דלתה-ויז'ן אליט	שלב מיקרוטיטר, מודול לייזר אולטימטיבי פוקוס, מצלמת DV Elite CoolSnap HQ2, SSI מכלול FP DV, ערכת אוברסיטה. שמן Oly 100x 1.4 NA, פריזמה Nomarski 100x LWD DIC, ENV ctrl IX71 uTiter opaQ 240 V
התחל את SoftWoRx	GE		תוכנת הדמיה שסופקה על ידי היצרן