הכנת חיסון Gardnerella vaginalis למידול זיהומים נמנים בדרכי השתן בעכברים

תקציר

מקור: O'Brien, V.P. ואחרים. זיהום בדרכי השתן החוזר של אשריכיה קולי שנגרם מחשיפה לשלפוחית השתן בגרדנרלה וגינליס בעכברים. J. Vis. Exp. (2020)

סרטון זה מדגים את הכנת חיסון גרדנרלה וגינליס ליצירת מודל עכבר לזיהום חוזר בדרכי השתן.

פרוטוקול

1. הכינו את חיסון Gardnerella vaginalis
   הערה: כל השלבים מתבצעים בתא אנאירובי. זמני הדגירה האידיאליים משתנים בין זנים שונים של G. vaginalis, כאשר חלק מהזנים נכנסים לשלב הסטטי ואף מתחילים למות מהר יותר מאחרים. לכן, יש לקבוע אמפירית את זמני הדגירה עבור זן מסוים לפני ביצוע ניסויים בעכברים. לא ידוע אם כל הזנים האחרים של G. vaginalis יגרמו לאותם תופעות במודל זה.
2. מתיחה של Streak G. vaginalis ממאגר מקפיא של -80°C אל צלחת NYCIII (ללא אנטיביוטיקה). דגרו את הצלחת בטמפרטורה אנאירובית ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.
3. בתא האנאירובי, יש לחסן 5 מ"ל של מדיום אנאירובי של NYCIII עם לולאה של 1 מיקרוליטר של תאים (מושבה אחת אינה מספיקה) מלוח NYCIII ולדוגר תרבית סטטית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתנאים אנאירוביים למשך 18 שעות. אין לכלול אנטיביוטיקה במדיום הגידול.
4. קבעו את^{ה-OD 600} של התרבית באמצעות ספקטרופוטומטר
   1. צנטריפוגה בנפח מוגדר (X) של תרבית ב-9600 × גרם למשך דקה אחת ושאיפה את המדיה. חישבו את נפח (Y) של תמיסת זרחן (PBS) כדי להחזיר את הכדור להשליך את הצפיפות האופטית של האינוקולום (OD) הרצויה להשגת יחידות יצירת מושבות (CFU) של 10⁸ ב-50 מיקרוליטר באמצעות המשוואה הבאה: X מ"ל × ODculture = Y מ"ל × ^{אינוקולום} OD, פתור את YY = (X מ"ל × ODculture) / ^חיסון OD
      הערה: ^החיסון של מנת יתר עבור JCP8151B^SmR הוא 5, אך יש לקבוע זאת אמפירית עבור זנים אחרים של G. vaginalis. לדוגמה, אם מסתובבים 3 מ"ל של תרבית^{נוזלית JCP8151B SmR} בלילה עם ODculture = 2.0: Y= (3 מ"ל × 2.0) / 5.0; לכן, יש להחזיר את הכדור ל-1.2 מ"ל PBS.
   2. החזירו את הכדור החיידקי ל-PBS לריכוז הרצוי. מדלל וציפוי סדרתי את החיסון כדי לקבוע את המינון האמיתי שנעשה בו שימוש בכל ניסוי. אל תסתמך רק על ערכי ה-OD.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
גלוקוז	סיגמא	G7528	עבור מדיית גדילה של NYCIII G. vaginalis
4-(2-הידרוקסיאתיל)-1-פיפראזין אתןסולפוני חומצה (HEPES)	סלגרו	25-060-Cl	עבור מדיית גדילה של NYCIII G. vaginalis
כלוריד נתרן	סיגמא	S3014	עבור מדיית גדילה של NYCIII G. vaginalis
פרוטאוז פפטון #3	פישר	DF-122-17-4	עבור מדיית גדילה של NYCIII G. vaginalis
תמצית שמרים	פישר	DF0127-17-9	עבור מדיית גדילה של NYCIII G. vaginalis
ספקטרופוטומטר	ביוכרום	80-3000-45	מדידת OD600 חיידקי
סטרפטומיצין	גיבקו	11860038	הוסף ל-G. vaginalis לוחות סלקטיביים NYCIII (1 מ"ג/מ"ל)