מודל עכבר לחקר המעבר הפתוגני של Streptococcus pneumoniae בעקבות זיהום נלווה ויראלי

תקציר

מקור: לנהרד, א. ואחרים. מודל עכבר למעבר של Streptococcus pneumoniae ממתיישב לפתוגן בעקבות זיהום נגיפי משחזר מחלה שהוחמרה על ידי הגיל. J. Vis. Exp. (2022)

הסרטון הזה מדגים מודל זיהום משותף לעכברים, שבו נגיף השפעת מפעיל את המעבר של Streptococcus pneumoniae ממתיישב לפתוגן. הוא מפרט את השלבים המעורבים בהתיישבות חיידקית, זיהום ויראלי והתקדמות מחלה.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. חיסון תוך אף בעכברים עם Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae) שגדל בביופילם

1. קנה עכברים והשתמש בהם בגיל הרצוי.
   הערה: עכברים בגילאי 3-4 חודשים מועדפים על פני מודלים של מארחים צעירים, ועכברים בגילאי 21-24 חודשים יכולים לשמש למידול אנשים מבוגרים בגיל >65. הנתונים המוצגים כאן הם מעכברים זכרים מסוג C57BL/6.
2. הפשיר את האליקוטים החיידקיים שגדלו בביופילם על קרח וסובב ב-1,700 × גרם למשך 5 דקות. הסר והשליך בזהירות את הסופרנטנט מבלי להפריע לכדור, שטוף את החיידקים על ידי השעיית הכדור מחדש ב-1 מ"ל של מלח מפוזר פוספט (PBS), וסובב שוב ב-1,700 × גרם למשך 5 דקות. הסר את הסופרנטנט והחזיר את הכדור בנפח הנדרש לריכוז הרצוי (כוון ל-5 ×^{10, 6} יחידות ליצירת מושבות (CFU)/10 מיקרוליטר לחיסון תוך-אף). אשר את כמות החיידקים על ידי הצבת החיסון המוכן על פלטות אגר דם.
3. החרינו את העכברים דרך האף ב-5 × 10⁶ CFU על ידי פיפט של 5 מיקרו ליטר מהאינקולום המדולל לכל נריס. ודא שאתה מחזיק את העכברים היטב, מייצב את הראש, עד שנשאפת את הנפח (בדרך כלל תוך שניות מהפיפסת הנפח לתוך הנרים). בצע את השלב הזה בהיעדר הרדמה כדי למנוע שאיבת ריאה של החינון.

2. זיהום ויראלי בנגיף שפעת A (IAV)

1. ב-48 שעות לאחר חיסון תוך-אף עם S. pneumoniae, הפשרה את זן ה-IAV המעניין על הקרח.
   הערה: הנתונים המוצגים כאן הם עם זן המותאם לעכברים של וירוס שפעת A A/PR/8/34 H1N1, שהושג באמצעות חילופי פעולה שיתופיים.
2. לאחר שהווירוס הפשר, יש לדלל את הווירוס ב-PBS לריכוז הרצוי; כוונו ל-20 יחידות יצירת פלאק (PFU)/50 מיקרוליטר לזיהום תוך-קנה הנשימה ו-200 PFU/10 מיקרוליטר לזיהום תוך-אף. לקבוצות נגועות-מדומה וחיידקים בלבד, השתמשו ב-PBS כדי לחסן את העכברים.
3. יש להניח חומר סיכה עיניים על עיני העכברים לפני ההרדמה. הרדימו את העכברים באמצעות 5% איזופלורן ואשר הרדמה באמצעות צביטה חזקה של האצבע.
4. לאחר ההרדמה, יש להוציא אותו מתא האיזופלוראן ולהדביק מיד את העכברים המורדמים ב-50 מיקרוליטר (20 PFU) של IAV תוך-קנה, תוך שימוש בפינצטה קהה כדי למשוך את הלשון מהפה ולטפח את נפח הנוזל לאורך קנה הנשימה.
5. מניחים את העכברים בכלוב נפרד ומנטרים עד להחלמה מלאה (הם מסוגלים לשמור על שכיבה סטרנלית [מסוגלים לשכב זקוף על החזה]).
6. לאחר ההחלמה, יש להחסן מיד את העכברים ב-10 מיקרו-ליטר (200 PFU) של IAV באמצעות שיטת ההעברה בשלב 1.3.
7. עכברי בית שעברו זיהום חיידקי וויראלי יחיד או כפול באותה קבוצת זיהום ומופרדים מהקבוצות האחרות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
חומצה אמינובנזואית 4-	פישר	AAA1267318	Mix I מלאי
פילטרים של 100 מיקרון	פישר	07-201-432
צינור פוליאתילן תוך-רפואי BD	פישר	427410	צינורות לשטיפת אף
מזרקים חד-פעמיים BD עם קצות Luer-Lok (1 מ"ל)	פישר	14-823-30
D39	האוסף הלאומי לתרבות טיפוס (NCTC)	NCTC 7466	זן Streptococcus pneumoniae
איזופלורן פיבטלי	פטרסון וטרינרי	07-893-8440	איזופלוראן להרדמה בזמן זיהום
אגר דם תרמו-מדעי עם גנטמיצין	פישר	R01227	לוחות אגר בדם עם האנטיביוטיקה גנטמצין
TIGR4	ATCC	BAA-334	זן Streptococcus pneumoniae