כימות עומס סטרפטוקוקוס מקבוצה B בלומן הנרתיק של העכבר באמצעות דגימה ותרבות כרומוגנית

תקציר

מקור: פטרס, ק. א. ודוראן, ק. ס. מודל עכבר של קולוניזציה נרתיקית של סטרפטוקוקוס בקבוצה B. J. Vis. Exp. (2016)

הסרטון הזה מדגים את הכימות של עומס סטרפטוקוקוס (GBS) בקבוצה B בנרתיק במודל עכבר באמצעות דגימה ותרבות כרומוגנית. הוא מפרט את השלבים באיסוף דגימות, ציפוי וספירת מושבות כדי לכמת את עומס GBS בלומן הנרתיק של העכבר.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. ניקוי הלומן הנרתיק לכמת עומס GBS

1. הכינו צינור מיקרו-צנטריפוגה אחד בנפח 1.5 מ"ל לכל עכבר על ידי הוספת 100 מיקרוליטר של מי מלח עם בופר פוספט (PBS). ממש לפני הדגימה, הרטיב מראש את המטוש ב-PBS.
2. הרסן את העכבר והכנס את המטוש 10 מ"מ ללומן הנרתיק. סובבי בעדינות את המטוש 4 פעמים בכיוון השעון ו-4 פעמים נגד כיוון השעון, תוך הפעלת לחץ קל על דופן הנרתיק.
3. העבר את המטוש לצינור מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל עם 100 מיקרו-ליטר של PBS. לפני הציפוי, יש לסבב את צינור המיקרוצנטריפוגה למשך ~15 שניות כדי לשחרר את החיידקים מהמטוש. מדלל כל דגימה באופן סדרתי ב-PBS וצלחת של 20 מיקרוליטר של דילול ביחס 1:10 עד 1:10,000 על לוחות אגר בינוני דיפרנציאליים שהוכנו לפי הוראות היצרן. דגרו את הלוחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. מושבות סטרפטוקוקוס מקבוצת B (GBS) ייראו בצבע ורוד בוהק או סגול. צמחייה אנדוגנית אחרת תודחק, או תיראה כמושבות כחולות, לבנים או אפורות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מטושי אלגינאט סידן סטריליים, שופכה-גניטליים	פוריטני	25-801 A 50
CHROMagar StrepB	DRG אינטרנשיונל	SB282
תמיסת מלח מפופר-פוספט של דולבקו פעם אחת	קורנינג	21-031-CV