הכנת תרבית חיידקים בקרקע לזיהום בקטריופאג'

תקציר

מקור: Cross, T., ואחרים, טכניקת העשרה אופטימלית לבידוד מיני חיידקי ארתרובקטר מבודדי דגימות קרקע. J. Vis. Exp.(2015)

הסרטון הזה מדגים את הכנת תרבית חיידקים לייצור חיידקים. הוא עוסק בשלבים של חיסון חיידק קרקע לתוך בקבוק מכוסה, קידום צמיחה אחידה באמצעות אוורור וניעור, ומעקב אחר צפיפות התאים באמצעות מדידות צפיפות אופטית. כאשר התרבית מגיעה לשלב הצמיחה האופטימלי, היא מוכנה לייצור בקטריופאג' יעיל.

פרוטוקול

הכנת תאי ארתרובקטר לבידוד פאג'

• תרבות ארתרובקטר sp. מושבות KY3901 נמרחו על צלחת אגר של Luria Bertani (LB) שהייתה מודגרת בטמפרטורה של 30°C במשך 2-3 ימים. בחרו מושבה והשתמשו בלולאה סטרילית כדי להוסיף אותה ל-250 מ"ל של מרק LB בבקבוק תרביות מפותח, ודגרו בתנור מנענע במהירות 225 סל"ד ב-30 מעלות צלזיוס.
• אפשר כ-24 שעות של גדילה כדי לקבל תאי פאזה אקספוננציאליים מאוחרים/סטציונריים מוקדמים לניסויים בזיהום פאג'ים. יש לעקוב מקרוב אחרי מצב הצמיחה החיידקיים כדי למנוע כניסה לתאים למצב הצמיחה הנייח האמצעי עד המאוחר.
  הערה: צמיחת התאים צריכה לכלול צפיפות אופטית OD₆₀₀ בין 0.5 ל-0.0.7 עבור הפרוצדות/שלבי הבידוד והטיהור.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אבקת LB Broth	פישר	BP9722-2
אגר מגורגר	פישר	BP1423-2
צינורות אפנדורף	פישר	05-408-129
פיפטות 5 מ"ל בודדות	פישר	13-678-11D
צינורות קוניים של 50 מ"ל	פישר	76002844
צינורות חרוטיים בגודל 15 מ"ל	פישר	76002845
פיפטות 10 מ"ל בודדות	פישר	13-676-10J
פיפטות 25 מ"ל בודדות	פישר	13-676-10K