זיהום בדרכי השתן הקשור לקטטר במודל עכבר

תקציר

מקור: קונובר, מ. ס. ואחרים, ג'. הקמה ואפיון של דלקות בדרכי השתן ו-CAUTI במודל עכבר. J. Vis. Exp. (2015)

סרטון זה מדגים את ההליך להרכבה והשתלת קטטר טרנס-שופכה בעכבר, ולאחר מכן חיסון חיידקי כדי לקבוע זיהום בדרכי השתן הקשור לקטטר ולחקור אינטראקציות בין מארח לפתוגן המתווכת על ידי ביופילם.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. פרוטוקול מודל CAUTI (זיהום בדרכי השתן הקשור לקטטר), הכנת מחט קטטרית למודל CAUTI

1. הסר את הפקק של מחט ה-30G. חתוך חתיכת צינור PE10 (פוליאתילן 10) בקוטר 7 מ"מ וחתיכת צינור סיליקון באורך 5 מ"מ כמו RenaSIL. השחיל את המחט עם צינור PE10 עד שהצינור נוגע בבסיס המחט.
2. לאחר מכן מזינים את החלק של 5 מ"מ למחט המכילה PE10. UV (אולטרה סגול) מעטא את מכלולי המחטים במהלך הלילה.
   הערה: בעת טעינת צינור הסיליקון, יש להשאיר כ-1 מ"מ מהצינור שמעבר לקצה המחט.

2. E. faecalis OG1RF הכנת אנוקולום חיידקי

1. הכינו את חיסון OG1RF החל מ-48 שעות לפני יום החיסון. פס OG1RF על צלחת BHI (עירוי מוח לב) ממלאי קפוא.
2. בחר מושבה, הסנן אותה ל-10 מ"ל של BHI ומגדל אותו סטטית במשך 18 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. צנטריפוגה את התרבית ושוטף את הכדור (3 פעמים) בנפחי 1 מ"ל סטרילי של 1x PBS.
3. החזירו את הכדור החיידקי ל-1x PBS (סליין עם בופר פוספט). מדדו צפיפות אופטית חיידקית והתאימו את הריכוז לגודל ההאינקולום הרצוי. הריכוז הסטנדרטי של האינוקולום הוא 10⁷; עם זאת, זה עשוי להשתנות בהתאם לעיצוב המחקר

3. השתלת קטטר

1. נקה את תחנת העבודה עם 70% אתנול וכסה את האזור בכיסוי סופג (או השתמש במכסה זרימה סטרילי).
2. חבר קטטר-מחט למזרק ריק של 1 מ"ל (שחפת או טוברקולין). חתכו חתיכת פאראפילם מרובע בגודל אינץ' אחד ומרחו מעט חומר סיכה כירורגי (בערך בגודל של עשר אגורות) מעל.
   הערה: שתי מחטים שונות משמשות להפקדת הקטטר ולחיסון כדי למזער חיסון מקרי בשל המניפולציה המכנית הנדרשת להשתלת קטטר. זה גם מאפשר נוחות של הכנת פחות מחטי חיסון.
3. הרדימו עכברי C57BL/6 על ידי הכנסתם לצנצנת זכוכית של 32 אונקיות המכילה כדור תזריקה לתה עם כדורי כותנה טבולים ב-3 מ"ל איזופלוראן או תא אידוי (בהתאם לפרוטוקול היצרן) עד שהם מחוסרי הכרה אך עדיין נושמים כרגיל (נשימה אחת לשנייה).
4. ואז להניח את העכבר על הגב על מגבת נייר ולפתוח את רגליו. כסו את אף העכבר בקונוס אף או צינור חרוטי של 50 מ"ל עם כדורי כותנה המכילים כמות קטנה (כ-1-2 מ"ל) איזופלורן.
   אזהרה: איזופלוראן הוא חומר הרדמה בשאיפה. יש להשתמש באזור מאוורר היטב ולהפחית את השאיפה על ידי החוקר.
5. יש לדופק בעדינות את שלפוחית השתן כדי לגרום למתן שתן ולהבטיח שלפוחית השתן ריקה. נגב את אזור השופכה עם מגב 100% אתנול.
6. חטא את אזור השופכה עם תמיסת 10% פובידון-יוד באמצעות אפליקטור עם קצה כותנה. טפחו את המחט/המזרק, הנקודה ראשונה, לתוך חומר הסיכה הניתוחי.
   הערה: פובידון-יוד משמש להשתלת קטטר, שהוא תמיסה אספטית חזקה יותר מאלכוהול. השתלת קטטר דורשת יותר מניפולציה מכנית כדי להחדיר את הקטטר, ולכן יש לה פוטנציאל גבוה יותר לזיהום.
7. הכנס את הקטטר לפתח השופכה. ברגע שנכנס, השתמשו בפינצטה כדי לדחוף את החלק הארוך (7 מ"מ PE10) לכיוון שלפוחית השתן, ובכך לדחוף את הקטטר הקטן (5 מ"מ סיליקון) ולהכניס אותו לשלפוחית השתן. הסר את המחט, כשהצינור בקוטר 7 מ"מ עדיין מחובר, מיד.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
חומר להכנת קטטר ומחטים:
מחטים של 30 G	BD Precision Glide	305106	30 G x 1/2 (0.3 מ"מ x 13 מ"מ)
צינורות פוליאתילן PE10	BD	427400	קוטר פנימי -0.011 אינץ' (0.28 מ"מ); קוטר חיצוני – 0.024 אינץ' (0.61 מ"מ)
צינור סיליקון מפלטינה RenaSIL 025	בריינטרי סיינטיפיק, בע"מ	גיסתו 025	קוטר פנימי - 0.012 x קוטר חיצוני 0.025, סליל 25 רגל
חומר לזיהומים:
איזופלורן – איזותזיה	באטלר שיין	29405	250 מ"ל
צנצנת זכוכית שקופה עם צדדים ישרים	קימבל צ'ייס	5413289V 21
מזרן תה מנירוסטה	Schefs-Amazon		מסנן תה פרימיום עם עלים רופפים של Schefs - נירוסטה - קיבולת גדולה -
כדורי כותנה לא סטריליים	פישרברנד	22-456-880
צינורות פלקון 50 מ"ל	VWR	89039-660
איזוטק 3 - מאדה	אוהמדה	1224478
פאנץ' באוזן	פישר סיינטיפיק	13-812-201	(כשצריך)
תמיסת בטדין	תמיסת בטדין		תמיסה מקומית של 10% פובידי-יוד
מקלות אוזניים	פישר סיינטיפיק	22-037-924	6 אינץ'
חיתולים לספסל	פישרברנד	14206 63	רפידות תחתונות סופגות (שטיחות בגודל 20"X36")
חומר סיכה כירורגי	Surgilube	0281-0205-36
מספריים ניתוחים	כלי מדעי ההימור, INC	14084-08
מלקחיים מיקרו-אדסון	כלי מדעי ההימור, INC	11018-12
מזרק של 1 מ"ל	BD	309659	קצה החלקה של טוברקולין
פאראפילם	בימיס	PM996	4 אינץ' x 125 רגל
מתקן אפנדורף	פישרברנד	05-541-1
צינורות אפנדורף	MIDSCI	AVX-T-17-C
איסוף קטטרים, שלפוחית וכליות:
הומוגנייזר	PRO Scientific INC	Bio-Gen Pro 200
צינור 5 מ"ל פוליפרופילן עם תחתית עגולה	BD	352063	להומוגניזציה של איברים
מגבת נייר	ג'ורג'יה-פסיפיק
אתנול	Pharmco-AAPER	11100020S	200 הוכחה
לוחות Costar™ Clear Polystyrene 96 בארות	קורנינג	3788
1x פוספט נתרן מלח	סיגמא-אלדריץ'	P3813
BRANSONIC Ultrasonic Cleaner 1210	חברת ברנסון אולטרסוניקס	1210