הקמת מודל עכברים לזיהומי כוויות עם חיידקים פתוגניים

תקציר

מקור: וואנג, י. ואחרים. In Vivo חקירת טיפול באור כחול אנטימיקרוביאלי לזיהומי כוויות עמידים לרב-תרופות Acinetobacter baumannii באמצעות הדמיית ביולומינצנציה. J. Vis. Exp. (2017)

הווידאו הזה מדגים כיצד לבסס זיהום כוויות בדגם עכבר על ידי מריחת בלוק פליז מחומם ואחריו אינקולום חיידקי פתוגני. החיידקים מתיישבים במטריצה החוץ-תאית החשופה ויוצרים ביופילם, המאפשר מחקרים ב-vivo של אינטראקציות בין המארח לפתוגן.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. מודל העכבר של זיהום כוויות הנגרם על ידי Acinetobacter baumannii ביולומינסנטי

1. השתמש בעכברי BALB/c בוגרות בגיל 7-8 שבועות ובמשקל 17-19 גרם. אפשר לעכברים להסתגל לתנאי המעבדה לפחות 3 ימים לפני תחילת הניסוי. שמרו על העכברים במחזור אור/חושך של 12 שעות בטמפרטורת החדר של 21 מעלות צלזיוס ותנו להם אוכל ומים לפי רצונם.
2. הרדימו את העכברים בהזרקה תוך-פריטונלית של קוקטייל קטמין-זילזין (100 מ"ג/ק"ג-20 מ"ג/ק"ג). נגעו בעדינות בפלפברה של כל עכבר עם מטוש כותנה; היעדר רפלקס הפלפברלי מרמז על עומק הרדמה מתאים. כסו את עיני העכבר במשחת וטרינרית כדי למנוע התייבשות במהלך ההרדמה.
3. גלח את העכברים בגב כדי לחשוף כמה שיותר עור באמצעות מכונת תספורת עם 50 להבים.
4. הניחו את מכסה צלחת פטרי בקוטר 35 מ"מ מתחת לבטנו של כל עכבר כדי לשמור על גבם אופקי יחסית.
5. הרתיחו מים בכוס של 250 מ"ל (80% מלא) באמצעות פלטת חימום זרם חילופין (VAC) בגודל 10" x 10", 220 וולט. טבלו בלוק פליז (חתך רוחב של 1 ס"מ על 1 ס"מ) לתוך הבקבוק עד שיושג שיווי משקל תרמי עם המים. האיזון התרמי בדרך כלל נמשך <5 דקות ומוצג על ידי רתיחה חוזרת של המים בכוס.
6. לפני יצירת פציעת הכוויה, יש לתת משככי כאבים מונעים מראש (הזרקה תת-עורית של 0.1 מ"ג/ק"ג בופרנורפין) להקלה על הכאב.
7. עשר דקות לאחר משככי הכאבים המוקדמים, לחצו בעדינות את בלוק הפליז המחומם לאזור המגולח בגב העכברים למשך 7 שניות כדי לגרום לפציעות כוויות.
   הערה: כדי למנוע פגיעה תרמית לצוות העובד, יש ללבש כפפות עמידות לחום בעת ביצוע הליך השריפה.
8. מתן 0.5 מ"ל תמיסת מלח סטרילית באמצעות הזרקה תת-עורית למניעת התייבשות.
9. חמש דקות לאחר גרימת הפגיעה התרמית, הזרקו 50 מיקרוליטר של תלייה חיידקית המכילה 5 על 10⁶ יחידות יוצרות מושבה (CFU) במלח מפוזר פוספט (PBS) על כוויות העכבר באמצעות פיפטה. לאחר מכן, באמצעות מטוש כותנה סטרילי בתנועה זיגזגית על העור, מרחו את האליקווטים על הכוויות כדי לפזר את תאי החיידקים באזור השרוף בצורה שווה ככל האפשר.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
עכבר	מעבדות צ'ארלס ריבר, וילמינגטון, מסצ'וסטס	BALB/c	גיל 7-8 שבועות, משקל 17-19 גרם
Acinetobacter baumannii	מרכז הרפואי הצבאי ברוק, פורט סם יוסטון, טקסס	בידוד קליני	מתח זוהר מהונדס
מזרקי אינסולין	פישר סיינטיפיק	14-826-79	BD במזרקי אינסולין במינון נמוך U-100 להזרקה
כלוריד נתרן	פישר סיינטיפיק	721016	0.9% נתרן כלוריד
תמיסה עם מסגרת זרחנית, תמיסה של 1x	פישר סיינטיפיק	BP24384	בופר פוספט סטנדרטי המשמש בפרוצדורות ביומולקולריות רבות
לולאות חיסון	פישר סיינטיפיק	22-363-605	למריחת אינוקלום חיידקי על פני השריפה של עכברים
בלוק פליז	Small Parts, Inc., מיאמי, פלורידה	10 מ"מ על 10 מ"מ	ליצירת כוויות בעכברים
כפפות חום גבוהות של Extreme Dragon PBI/Kevlar	סופריור גלוב וורקס בע"מ, צ'יקטווגה, ניו יורק	PBI83514	כפפות עמידות לחום
צלחות גריינר	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 מ"מ ×10 מ"מ
לוח חימום דיגיטלי Corning	Cole-Parmer Instrument Company, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, למים רותחים
מיטת ניתוח מחוממת במים דקים של עכבר/חולדה	מערכות E-Z	EZ-211	מונע אובדן חום והיפותרמיה במהלך ניתוח
משחה וטרינרית	S&K פארמה, GmbH	קרטו ביצ'ירון 5%, אוגנסאלבה	משחת עיניים למניעת יובש בעיניים