הדמיית ביולומינסציה של פצעי כוויות נגועים באצינטובקטר באומאני בעכברים

תקציר

מקור: וואנג, י. ואחרים. In Vivo חקירת טיפול באור כחול אנטימיקרוביאלי לזיהומי כוויות עמידים לרב-תרופות Acinetobacter baumannii באמצעות הדמיית ביולומינצנציה. J. Vis. Exp. (2017)

הסרטון הזה מדגים את ההליך להדמיית זיהומים מפצעי כוויה בעכברים שחוסנו ב-Acinetobacter baumannii הנושא אופרון ביולומינצנטי. המחקר מדגים כיצד חמצון תת-קרקע מוקץ בלוציפראז מייצר אור פרופורציונלי לעומס חיידקים, ומאפשר ניטור בזמן אמת של התקדמות הזיהום באמצעות מערכת הדמיה ביולומינצנטית.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. דימות ביולומינסציה של זיהומים בעכברים

1. דמיינו את העכברים באמצעות מערכת הדמיה בתאורה נמוכה הכוללת מצלמת מכשיר מטען מוגבר, בקר מצלמה, תא דגימות ומעבד תמונה.
2. הרדימו את העכברים בהזרקה תוך-פריטונלית של קוקטייל קטמין-זילזין (100 מ"ג/ק"ג - 20 מ"ג/ק"ג). לגעת בעדינות בפלפברל של העכברים עם מטלית כותנה; היעדר רפלקס הפלפברלי מרמז על עומק הרדמה מתאים.
3. התחילו את תוכנת ההדמיה החיה. בלוח הבקרה שמופיע, לחץ על אתחול. המתינו עד שצבע קופסת הטמפרטורה יהפוך לירוק, מה שמעיד שטמפרטורת השלב בתא הדגימה הגיעה ל-37 מעלות צלזיוס.
4. הניחו את העכברים על הבמה (37 מעלות צלזיוס) בתא הדגימה של מערכת ההדמיה, כאשר הכוויות הנגועות ישירות מתחת למצלמה.
   הערה: הביהלומינציה של החיידקים עלולה לרדת כאשר הכוויות מתייבשות. לכן, מומלץ ללחלח את כוויות העכבר עם PBS לפני ההדמיה.
5. בלוח הבקרה, שים סימון ליד "זוהר". בחר "חשיפה אוטומטית" כדי שזמן החשיפה להדמיה יוכל להיות אופטימלי על ידי תוכנת ההדמיה החיה בהתבסס על עוצמת הביולומינסצנציה.
6. בחר "C" מתוך רשימת "שדה התצוגה". בחר באפשרות "סריקה בטווח בינוני" כדי לאפשר לתוכנה לקבוע את מרחק המוקד. שים סימון וי ליד Overlay.
7. לחץ על "רכוש" כדי לתפוס את התמונה. בתיבת "עריכת תווית תמונה", לחץ על "אישור"; יופיעו "חלון תמונה" ו"פלטת אגרה".
8. הגדר פרמטרים של ROI אוטומטי לבחירה אוטומטית.
9. כימות את עוצמת הביולומינסנציה כיחידות זוהר יחסיות (RLUs) והצגת הביולומינסנציה בסולם צבע מזויף הנע בין ורוד (הכי אינטנסיבי) לכחול (הפחות עוצמתי).
10. חשב את שיעור ההישרדות של החיידקים בכוויות עכברים בנקודות זמן משתנות בהתבסס על ניתוח עוצמת ביולומינסציה. שיעור ההישרדות של החיידקים בנקודת זמן נתונה = עוצמת הביולומינסנציה שנמדדה בנקודת הזמן הזו / עוצמת הביולומינסצנציה שנמדדה ממש לפני החשיפה לאור כחול אנטימיקרוביאלי.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
IVIS	פרקין אלמר בע"מ, וולת'ם, מסצ'וסטס	IVIS לומינה סדרה III	הדמיה פרה-קלינית בגוף
LED דיודה פולטת אור	VieLight Inc, טורונטו, קנדה	415 ננומטר	מקור אור להארה
עכבר	מעבדות צ'ארלס ריבר, וילמינגטון, מסצ'וסטס	BALB/c	גיל 7-8 שבועות, משקל 17-19 גרם
Acinetobacter baumannii	מרכז הרפואי הצבאי ברוק, פורט סם יוסטון, טקסס	בידוד קליני	מתח זוהר מהונדס
צלחות גריינר	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 מ"מ ×10 מ"מ