טיפול באור כחול לזיהומים חיידקיים עמידים לתרופות בפצעי כוויות במודל עכבר

תקציר

מקור: וואנג, י. ואחרים. חקירה חי של טיפול באור כחול אנטימיקרוביאלי לזיהומי כוויות עמידים לרב-תרופות Acinetobacter baumannii באמצעות הדמיית ביולומינסצנציה. J. Vis. Exp. (2017)

סרטון זה מדגים את ההליך לטיפול בזיהומים בפצעי כוויות הנגרמים על ידי חיידקים עמידים לתרופות ביולומינצנטיים בעכברים, באמצעות טיפול באור כחול, ולאחר מכן הדמיית ביולומינסנציה למעקב אחר יעילות הטיפול.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. טיפול באור כחול אנטימיקרוביאלי לזיהום A. baumannii בעכברים

1. הרדימו את העכברים בהזרקה תוך-פריטונלית של קוקטייל קטמין-זילזין (100 מ"ג/ק"ג - 20 מ"ג/ק"ג). היעדר רפלקס פלפברלי מצביע על עומק הרדמה מתאים.
2. חלק את העכברים באקראי לקבוצה שטופלה ב-aBL (n = 10) וקבוצת ביקורת לא מטופלת (n = 10).
3. לקבוצת הטיפול באור כחול אנטימיקרוביאלי (aBL), כסו את עיני העכברים בנייר אלומיניום כדי למנוע חשיפה מופרזת לאור. הניחו את כוויות העכבר ישירות מתחת לדיודה הפולטת אור (LED), עם מכסה של צלחת פטרי בקוטר 35 מ"מ מתחת לבטן העכבר כדי לשמור על גבם אופקי.
4. החלף את מד הכוח/אנרגיה שהוזכר בשלב 3.5 בעכבר על צלחת פטרי מרובעת. כוון את גובה העכבר חזרה למצב שבו המרחק בין צמצם ה-LED למשטח השריפה שווה לזה שבין פתח ה-LED לבין רמת חיישן האור של מד ההספק/אנרגיה.
5. הקרינו את הכוויות הנגועות בהקרנה של 100 mW/^cm2. למסור aBL במינונים של 72 J^/cm2 עד שמגיעים למנה כוללת של 360 J/^cm2 (למשל, 0, 72, 144, 216, 288, ו-360 J/^cm2). לאחר כל מינון אור, בצע הדמיה ביולומינצנטית לעכברים.
6. בקבוצת הביקורת שלא טופלה, יש לבצע הדמיה ביולומינסצנטית של כוויות העכברים, תוך שימוש באותם מרווחי זמן כמו בקבוצת ה-aBL.
7. לפני החלמת העכברים, מניחים אותם על מיטת ניתוח מחוממת במים כדי למנוע אובדן חום והיפותרמיה. התבוננו בפעילות וברפלקס הפלפרלי של העכברים עד להחלמה. לאחר ההתאוששות של העכברים, תן להם 2-3 בכל כלוב.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
IVIS	פרקין אלמר בע"מ, וולת'ם, מסצ'וסטס	IVIS לומינה סדרה III	הדמיה פרה-קלינית בגוף
LED דיודה פולטת אור	VieLight Inc, טורונטו, קנדה	415 ננומטר	מקור אור להארה
מד כוח/אנרגיה	Thorlabs, Inc., ניוטון, ניו ג'רזי	PM100D	גלאי קרינת אור
עכבר	מעבדות צ'ארלס ריבר, וילמינגטון, מסצ'וסטס	BALB/c	גיל 7-8 שבועות, משקל 17-19 גרם
Acinetobacter baumannii	מרכז הרפואי הצבאי ברוק, פורט סם יוסטון, טקסס	בידוד קליני	מתח זוהר מהונדס
מלח עם בופר זרחן, תמיסה 1x	פישר סיינטיפיק	BP24384	בופר פוספט סטנדרטי המשמש בפרוצדורות ביומולקולריות רבות
קצות פיפט Fisher Scientific Redi-Tip, 1-200 מיקרוליטר	פישר סיינטיפיק	02-707-502	טיפים לפיפט
בלוק פליז	Small Parts, Inc., מיאמי, פלורידה	10 מ"מ על 10 מ"מ	ליצירת כוויות בעכברים
כפפות Extreme Dragon PBI/Kevlar High-Heat	סופריור גלוב וורקס בע"מ, צ'יקטווגה, ניו יורק	PBI83514	כפפות עמידות לחום
צלחות גריינר	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 מ"מ ×10 מ"מ
פלטה חמה דיגיטלית של קורנינג	Cole-Parmer Instrument Company, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, למים רותחים
מיטת ניתוח מחוממת במים עם קו דק של עכבר/עכברים	מערכות E-Z	EZ-211	מונע אובדן חום והיפותרמיה במהלך ניתוח
משחה וטרינרית	S&K פארמה, GmbH	קרטו ביצ'ירון 5%, אוגנסאלבה	משחת עיניים למניעת יובש בעיניים