שינויים מורפולוגיים בהדמיית חיידקים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה של תאים חיים

Abstract

מקור: ברזוזובסקי, ר. ס. ואחרים. מיקרוסקופיית פלואורסצנציה של תאים חיים לחקר מיקום חלבונים תת-תאיים ושינויים במורפולוגיה של תאים בחיידקים. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים מיקרוסקופיה פלואורסצנציונית של תאים חיים כדי להמחיש שינויים מורפולוגיים בזמן אמת בחיידקים. הוא מפרט את השלבים הכרוכים בהדמיה, רכישת טיימ-לאפס ודקונבולוציה לקבלת תמונות ברזולוציה גבוהה בזמן אמת.

Protocol

1. הדמיה

1. ביום הניסוי, הפעל את מערכת המיקרוסקופ. הפעל את תוכנת ההדמיה (ראה טבלת חומרים) על ידי לחיצה על האייקון המתאים בשולחן העבודה. אתחול את המיקרוסקופ על ידי לחיצה על אפשרות אתחול מיקרוסקופ (הכפתור המוצג עם מיקרוסקופ עליו) בתיבת הדו-שיח של ההפעלה של התוכנה. ודאו שהמטרת מורדת במלואה באמצעות התכוונון גס במיקרוסקופ לפני האתחול.
   הערה: לאחר האתחול, צריכות להופיע שלוש תיבות דיאלוג נוספות בנוסף לתפריט ההתחלה: resolve3D, איסוף נתונים ומוניטור סינון.
2. יש להניח טיפה של שמן של 1.517 (מקדם שבירות) על מטרה לטבילה פי 100 שסופקה על ידי היצרן (פתח מספרי = 1.4, מרחק עבודה = 0.12 מ"מ; ראו טבלת חומרים

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
אגרוז	פישר ביוריאגנטים	BP160-100	ציון ביולוגיה מולקולרית - EEO נמוך
FM4-64	Invitrogen	T3166	מיקרוסקופיה
צלחת תחתית זכוכית	MatTek	P35G-1.5-14-C	מיקרוסקופיה
מיקרוסקופ	GE	דלתה-ויז'ן אליט	מעמד מיקרוסקופ הפוך מותאם אישית של Olympus IX-71; מגדל תאורה מותאם אישית ומודול תאורה משודרת. מטרות: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 מ"מ); שמן אולימפי 100X (1.4, משקל 0.12 מ"מ); DIC Prism Nomarski ל-100X Objective; מצלמת CoolSnap HQ2; SSI Assembly 7-color; תא בקרה סביבתית - אטום.
PC190723	מיליפורסיגמא	3445805MG	מעכב FtsZ
סופטוורקס	GE		תוכנת הדמיה שסופקה על ידי היצרן