שיטת זכוכית כיסוי תאית להיווצרות ביופילם חיידקי במבחנה

תקציר

מקור: בודואן, ט. ואחרים. המחשת השפעות הליחה על התפתחות ביופילם באמצעות מודל זכוכית כיסוי עם תאים. J. Vis. Exp. (2016)

סרטון זה מדגים את השימוש בזכוכית כיסוי תאית לחקר השפעת גורמי מארח ליחה שמקורם בחולה בפיברוזיס ציסטיק על התפתחות ביופילם חיידקיים.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים איסוף דגימות בוצעו בהתאם להנחיות ה-IRB של המכון.

1. שיטת זכוכית כיסוי תאית להיווצרות ביופילם
   1. לגדל בידוד חיידקי מעניין בלילה במדיה רצויה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם ניעור (200 סל"ד).
      הערה: נעשה שימוש במספר חיידקים שונים, כולל מבודדים קליניים Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Burkholderia cepacia complex ו-Achromobacter xylosoxidans. בחירת המדיה תלויה בזנים ובתנאים הרלוונטיים, אך ניתן להשתמש במדיום LB (מרק לוריה) בניסויים ראשוניים.
   2. מתרבית לילה, הניחו 40 מיקרול תרבית ב-4 מ"ל של מדיום טרי וגדלו במשך 3-4 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם ניעור (200 סל"ד) כדי לקבל תרבית עם צפיפות אופטית של 600 ננומטר (OD600) של כ-0.5-0.6.
   3. דילל את התרבית משלב 1.2 עד 1/5 במדיה הרצויה עם סינון ליחה של 10% או בלי סינון ליחה (כבקרה). ניתן לבדוק ריכוזים נוספים של סינון ליחה (כלומר, 50% או 100%).
   4. השתמשו ב-200 מיקרוליטר מדילול כדי לזרוע בארות בתאי שקופה.
   5. אפשרו לחיידקים להידבק במשך 4 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ללא רעידה.
   6. אחרי 4 שעות, הסר את המדיה ושוטף בעדינות את הביופילם עם 1x חומר טרי. החלף במדיה טרייה של 200 מיקרוליטר.
      הערה: כדי לחקור את השפעות הליחה על הביופילם, המדיה הטרייה צריכה להכיל סופרנטנט ליחה.
   7. אפשר לביופילמים לגדול לזמן הרצוי בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ללא רעידה, החלפת מדיה כל 12 שעות, ללא שטיפה עד לזמן המיקרוסקופיה.
      הערה: כדי לחקור את השפעת סופרנטנטים של ליחה על רגישות לאנטיביוטיקה לביופילם, מתווספות אנטיביוטיקות למדיה לאחר 24 שעות של צמיחת ביופילם ונשמרות במדיה עד לצביעה והדמיה של ביופילמים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Lab-Tek II זכוכית כיסוי עם תאים, #1.5 בורוסיליקט, 8 בארות	תרמו סישר סיינטיפיקל	155409
מילרס LB Broth	תרמו פישר סיינטיפיק	12780-052	מדיה סטנדרטית לצמיחה לילה/ביופילם