הסרטון הזה מדגים שיטה במבחנה כדי להעריך כיצד ליחת סיסטיק פיברוזיס שמקורה במטופל משפיעה על יצירת ביופילם חיידקים. באמצעות שקופיות תא, צביעה פלואורסצנטית ומיקרוסקופיה קונפוקלית, הוא חושף עובי מוגבר, ארכיטקטורה משתנה וביומסה בוגרת ערך גבוהה יותר בביופילמים שגודלו בליחה, ומדגיש את תפקיד רכיבי המארח בעיצוב התפתחות הביופילם.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הדמיה קונפוקלית של ביופילמים חיידקיים שנגרמו על ידי ליחה מתנדלקת אצל חולי סיסטיק פיברוזיס
213 צפיות
⸱
26 בפברואר 2026
במאמר זה
תקציר
פרוטוקול
כל ההליכים הכוללים איסוף דגימות בוצעו בהתאם להנחיות ה-IRB של המכון.
צביעת ביופילמים ומיקרוסקופיה קונפוקלית
- לאחר זמן הגדילה הרצוי (24-48 שעות הכי טוב), הסר את המדיה מבארות התא ושוטף בעדינות כל תא פעמיים עם 300 מיקרול PBS סטרילי.
- הכינו תערובת צביעה לביופילם על ידי ערבוב של 1 מיקרול מכל צבע (המסופק בערכת הקיימות) עבור כל מ"ל תמיסה נדרשת. הכינו צבע במים או בתמיסת מדיה.
הערה: היצרן ממליץ על מים.
- הוסיפו 200 מיקרול תערובת צבע לכל באר זכוכית כיסוי עם תא ודגרו בטמפרטורת החדר, בחושך למשך 45 דקות.
- הסר תערובת צבע מהתאים ושוטף כל באר ב-300 מיקרול של PBS סטרילי. הסר את PBS והחלף אותו במים או מדיה טריים.
- המשך בהדמיה של ביופילמים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Lab-Tek II זכוכית כיסוי עם תאים, #1.5 בורוסיליקט, 8 בארות | תרמו סישר סיינטיפיקל | 155409 | |
| ערכת Viabilty ביופילם Filmtracer Live/Dead | תרמו פישר סיינטיפיק | L10316 | |
| מילרס LB Broth | תרמו פישר סיינטיפיק | 12780-052 | מדיה סטנדרטית לצמיחת גאת'/ביופילם בלילה |
| מלח עם בופר פוספט (Dulbecco A) | אוקסואיד | BR0014G | שטיפת תאי ביופילם לאחר הסרת מדיה |
| צייס אקסיוורט 200 מטר | קרל צייס |
