הכנת מודל שאיבת אורופרינגיאלית של עכברים לזיהוי זיהומים חיידקיים בריאותיים

תקציר

מקור: Nielsen, T. B. ואחרים, מודל שאיפת אורופרינגיאלית של דלקת ריאות חיידקית הקשורה למכונת הנשמה ודלקת ריאות חיידקית נרכשת בבית חולים. J. Vis. Exp. (2018)

הסרטון הזה מדגים את התהליך של העברת חיידקים דרך האורופרינקס לריאות של עכבר מורדם, כדי לגרום לזיהום ריאתי ולעורר תגובה חיסונית.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים המוסדית המקומית וועדת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. חיסון/הדבקה של עכברים

1. תלה עכבר מורדם, ותולה אותו על חותכות עליונות על חוט דק וחזק (למשל, חוט דנטלי) המחובר לאובייקט קבוע בגובה כפול מאורך גוף העכבר (למשל, 20 ס"מ) מעל משטח הפעולה (למשל, שולחן מעבדה).
2. משוך בעדינות את לשון העכבר מפיו באמצעות מלקחיים סטריליים וקהים. העבר את הלשון לאצבע סטרילית עם כפפה כדי למנוע ריסוק מקרי של לשון העכבר. החזק את הלשון מחוץ לפה, כדי לאפשר גישה לאורופרינקס ולמנוע בליעת החיסון לצד.
3. בעת החזקת לשון העכבר, הנח את האינוקולום של 50 מיקרולטר (השעיה חיידקית) בתוך האורופרינקס באמצעות מיקרופיפט; האורופרינקס ממוקם במפגש בין חלל הפה לבין הלוע לכיוון אחורי הפה.
   הערה: חשוב מאוד לספק נוזל רק באמצעות פיפטינג לעצירת המיקרופיפט. העכבר יפסיק לנשום למספר שניות כאשר החיסון מונח באורופרינקס; בסופו של דבר, שאיבה רפלקסיבית תגרום לעכבר לשאוף את השעיין החיידקי, כפי שמתברר על ידי רעש הפיצוץ המיוחד של נוזל החודר לריאות, מה שמוביל לזיהום בדלקת ריאות.
4. אם החיסון לא ממוקם רחוק מספיק כדי לחסום נשימה תקינה, לחץ על הנשימה עם מלקחיים כדי לכפות שאיפה רפלקסיבית דרך הפה ולשאוף את החיסון לאחר מכן.
5. לאחר החיסון, שחרר את הלשון, הוצא את העכבר מהחוט התלוי, שים אותו בכלוב ועוקב עד שיתעורר מהרדמה.

2. מעקב אחר התקדמות המחלה

הערה: עקב סבל בעלי החיים, יש להשתמש במדדים שונים כדי להצביע על מתי העכברים מתים; המתת חסד צריכה להתבצע לאחר קביעה זו, בהתאם לפרוטוקול IACUC שאושר בעבר; סימנים שונים למוות כוללים טמפרטורת גוף, ירידה במשקל, מראה, הליכה וסמנים ביולוגיים נוספים שניתן להשיג מהדם (למשל, באמצעות iSTAT).

1. הורד את העכברים בהתאם לפרוטוקול IACUC שאושר בעבר (למשל, CO₂ ואחריו פריקת צוואר הרחם).
2. הסרת הריאות מעכבר שהושמד על ידי חיתוך קנה הנשימה, העורק הריאתי והווריד הריאתי קרוב לריאות.
   1. מיקרוסקופיה
      1. הניחו את הריאות (או החלק) בתבנית דגימה.
      2. מלאו את תבנית הדגימה בתרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (O.C.T.), תוך טבילה מלאה של הרקמה.
      3. הקפיאו את הדגימה ב-80 מעלות צלזיוס.
      4. שלחו את הדגימה למעבדת פתולוגיה לחתך ולהרכיב על שקופיות למיקרוסקופיה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
חדר ההרדמה	תאגיד קנט המדעי	VetFlo-0720	מכיל עד 5 עכברים
קריומולד, בגודל בינוני	סאקורה טישו-טק	4566	תבניות ויניל חד-פעמיות, 15×15×5 מ"מ
חוט דנטלי	אורל-בי	37000469537	קשירה לעמוד היציב כ-6 אינץ' מעל גובה השולחן
מלקחיים	VWR	82027-440	משמש בעדינות להוציא לשון מפיו של עכבר
איזופלוראן להרדמה	אבוט	10015516	ניתן להשתמש בתרופה חלופית; שנו את ההליך בהתאם
מחסנית iSTAT	אבוט	03P79-25	ישנם מחסניות שונות שמתאימות לצרכים שלך
קטמין, 100 מ"ג/מ"ל	אספקת הרפואה המערבית	4165	לדלל 1:10 ב-PBS ל-1 מ"ג/מ"ל ולשלב עם זילזין ב-1 מ"ג/מ"ל
משחה לעיניים	אקורן	דמעות מתחדשות	הימנעו מלגעת בעין עם קצה המתקן
מלח ממוגן בפוספט (PBS)	קורנינג	21-031-CM	PBS של דולבקו ללא סידן ומגנזיום
קצות פיפט, 200 מיקרוליטר	VWR	10017-044	אוטוקלב לפני השימוש
פיפטטר, 200-מיקרוליטר	גילסון	פיפטמן P200	אוטוקלאב וכייל לפני השימוש
מפיץ, תא חיידקי	בל-ארט	F377360006	לחטא על ידי אפייה או אוטוקלאב לפני כל שימוש
בקבוקון, קריוגני, 2.0 מ"ל	קורנינג	430659	משמש לאחסון קריוגני של אינקולה חיידקית מרוכזת