ניטור קולוניזציה חיידקית של שורשי Arabidopsis thaliana במערכת ללא קרקע

במאמר זה

תקציר

מקור: האריס, ס. ל. ואחרים. ניטור קולוניזציה ותחזוקה של חיידקים בשורשי Arabidopsis thaliana במערכת הידרופונית צפה. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים פרוטוקול למעקב אחר התיישבות חיידקים הקשורים לשורשים על שתילי Arabidopsis thaliana שגדלו במערכת ללא קרקע. לאחר הקולוניזציה, החיידקים מופרקים באמצעות סוניקציה, מדוללים, מצופים ומודגרים ליצירת מושבות המשקפות את ההתקשרות והחיוניות של חיידקים.

פרוטוקול

איסוף חיידקים לספירת תאים ברי קיימא

הערה: ניתן לקבוע את מספר החיידקים לכל שורש שתיל בכל נקודת זמן דגירה. ניתן לעקוב אחרי ההתיישבות בין 0 ל-18 שעות, בעוד שניתן לעקוב אחרי תחזוקה מ-18 שעות ואילך.

הסר את השתילים מהרשת (איור 1, שלב 5). הנח בעדינות מלקחיים מחוטאים בלהבה מתחת לעלים (אך בצד העלה של הרשת), וצבוט בעדינות את הגבעול. הזיזו את השתילים כלפי מעלה והרחק מהרשת כדי לשחרר את השורש מבלי לשבור אותו. אם השורש נשבר, גרדו בעדינות את תחתית הרשת כדי לאסוף את כל האורך.
הסר חיידקים משורשי הצמח. העבר את החיידקים לבארות של לוח עם 24 בארות המכיל 1 מ"ל ddH₂0. סוניקציה של הדגימות.
כמת את חיידקי השורשים.
1. לבצע דילול סדרתי של 10 פעמים של דגימות סוניקיות עד ^ל-10-6 דילול בתווך גידול חיידקים. הוסיפו 50 מיקרו ליטר מכל דילול לפלטות אגר בודדות ומרחו עם חרוזי זכוכית סטריליים. דגרו צלחות בטמפרטורה האופטימלית לחיידקים עד שהמושבות הבודדות יהיו ניתנות לספירה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

איור 1: בדיקה להתיישבות חיידקית ותחזוקה על שורשי A. thaliana . שתילי A. thaliana שגדלו על רשת פלסטיק מעוקרת הועברו למדיום גדילה מותאם לחיידקים [כאן, 0.1 x LB (Luria Broth) Lennox]. החיידקים התיישבו בשורש במשך 18 שעות בזמן שהצמח צף...