פוטובלינציה של פיגמנטים ציאנובקטריאליים להדמיית חלבונים המווסתים צמיחה

תקציר

מקור: ז'אן, י. ואחרים. הלבנת הפוטוקול מאפשרת הדמיה ברזולוציה על-גבוהה של טבעת ftsZ בציאנובקטריה פרוכלורוקוקוס. J. Vis. Exp. (2018).

סרטון זה מדגים את ההליך של הלבנת פיגמנטים בתאי ציאנובקטריאליים באמצעות אור קסנון בתנאים קרים לשיפור הדמיית פלואורסצנציה של חלבונים מווסתים את הצמיחה.

פרוטוקול

1. הלבנת פוטו-פיל של פיגמנטים כלורופיל בשלב חסימה

1. העבר את הכיסוי לתבנית הצבעה. הוסיפו 50 מיקרוליטר של בופר חסימה, שמכיל 0.2% (v/v) סרום עזים לא יוני-100 ו-3% (v/v) סרום עזים, מעל הכיסוי.
2. הניחו את כל פלטת הצביעה על קרח והעבירו אותה מתחת למקור האור של קסנון לפוטו-הלבנה למשך לפחות 60 דקות, בעוצמת אור של 1,800 מיקרומול פוטונים למטר²·שניות.
3. לאחר הלבנה וחסימה, הסר בזהירות את בופר החסימה על ידי ספיגתו עם קצה מגבת נייר.
   הערה: עוצמת אור הזנון כה גבוהה שנדרשים משקפי שמש מתאימים להגנה על העיניים. בינתיים, עטוף את מקור האור והפלטה בנייר אלומיניום כדי למנוע דליפת אור, שעלולה לגרום לנזק לעיניים. בדקו את הכיסוי כל 15 דקות כדי לוודא שהוא נשאר לח. אם הוא יבש, הוסיפו 50 מיקרוליטר של בופר חסימה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
חלקיקי פוליסטירן	ספרוטק	עמ' 20-10	2.0-2.4 מיקרון
קאברסליפ	מריאנפלד	111580	18 מ"מ ∅, עובי מס' 1
אתנול	שרלאו	ET00021000
הידרוברומיד פולי-אל-ליזין	סיגמא-אלדריץ'	P9155	מול משקל 70,000-150,000
פאראפורמלדהיד	סיגמא-אלדריץ'	158127
תמיסת גלוטראלדהיד, 50%	סיגמא-אלדריץ'	340855
PBS	סיגמא	P3813
טריטון X-100	סיגמא	T8787
מלח דינתריום EDTA, 2-הידראט	ביוטכנולוגיה זהב	E-210-500
בסיס טריזמה	סיגמא	T1503
ליזוזים	סיגמא	L6876
סרום עזים	סיגמא	G9023
מקור אור קסנון XD-300			250 W