אנו מתארים שיטה להכין פרוסות בהיפוקמפוס organotypic כי ניתן להתאים בקלות לאזורים אחרים במוח. פרוסות המוח מוטלות על ממברנות נקבוביים התקשורת בתרבות מותר להקים ממשק. שיטה זו משמרת את הארכיטקטורה ברוטו של ההיפוקמפוס עד 2 שבועות בתרבות.
אנו מתארים שיטה להכין פרוסות בהיפוקמפוס organotypic כי ניתן להתאים בקלות לאזורים אחרים במוח. פרוסות המוח מוטלות על ממברנות נקבוביים התקשורת בתרבות מותר להקים ממשק. שיטה זו משמרת את הארכיטקטורה ברוטו של ההיפוקמפוס עד 2 שבועות בתרבות.
ההיפוקמפוס, רכיב של המערכת הלימבית, משחק תפקידים חשובים בזיכרון לטווח ארוך וניווט מרחבי 1. נוירונים בהיפוקמפוס יכול לשנות את עוצמת הקשרים שלהם לאחר תקופות קצרות של הפעלה חזקה. תופעה זו, הידועה בשם potentiation לטווח ארוך (LTP) יכולה להימשך שעות או ימים הפך את המנגנון המועמד הטוב ביותר למידה וזיכרון 2. בנוסף, אנטומיה מוגדר היטב וקישוריות של ההיפוקמפוס 3 הפכה אותה מערכת מודל קלאסי ללמוד הילוכים הסינפטי ו 4 הפלסטיות הסינפטית.
כפי הבנתנו את הפיזיולוגיה של סינפסות בהיפוקמפוס גדל שחקנים מולקולריים הפך מזוהה, צורך לתמרן חלבונים סינפטיים הכרח. תרבויות בהיפוקמפוס Organotypic להציע את האפשרות למניפולציות הגן קל התערבות פרמקולוגית מדויק אבל לשמור על ארגון הסינפטי הוא קריטי להבנת תפקוד הסינפסה בהקשר נטורליסטי יותר בתרבות שיטות שגרתיות נוירונים ניתק.
כאן אנו מציגים שיטה להכין ותרבות פרוסות בהיפוקמפוס, כי ניתן להתאים בקלות לאזורים אחרים במוח. שיטה זו מאפשרת גישה קלה את פרוסות עבור מניפולציה גנטית באמצעות גישות שונות כמו זיהום ויראלי או 5,6 biolistics 7. בנוסף, פרוסות ניתן לשחזר בקלות עבור מבחני ביוכימיים 8, או להעביר מיקרוסקופים הדמיה 9 או בניסויים אלקטרו 10.
1. לפני תחילת הכנת פרוסות בהיפוקמפוס.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
שיטה זו מבוססת על השיטה שתוארה לראשונה על ידי Stoppini et al. 11 ומציע בצורה מהירה פרוסות תרבות בהיפוקמפוס. ההיבט החשוב ביותר של פרוטוקול זה היא לשמור על פרוסות סטרילי ולכן זה קריטי להשתמש בטכניקות סטרילי המתאים כראוי לחיטוי לעקר את כל החומר במגע עם רקמות.
מקורות שונים serums יכולים להשפיע על איכות הפרוסות. אנו ממליצים על בדיקות קבוצות הראשונות. אם הזיהום הוא בעיה חוזרת, לבדוק החממה בתרבית רקמ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
עבודה זו מומנה על ידי NINDS - NIH R01NS060756
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מערכות השתלה לתרבית תאים (Inserts) | EMD Millipore | PICM03050 | |
| פלטות 6 באריים | BD Biosciences | 353046 | |
| סורק רקמות (Tissue Slicer) | Stoelting Co. | 51425/51415 | |
| מיקרוסקופ | Olympus Corporation | SZX7-ILLD2-100 | |
| כלי ניתוח להיפוקמפוס | F.S.T. | 10099-15 | |
| מספרי עבודה גדולים, Perfection | F.S.T. | 37500-00/37000-00 Right/ Left handed | |
| שפכטל איריס | F.S.T. | 10093-13 | |
| שפכטל ישר | F.S.T. | 10094-13 | |
| מיקרו-שפכטל כף עגול | VWR international | 57949-039 | |
| מחט ניתוח בעלת קצה חיתוך יחיד | Electron Microscopy Sciences | 72946 | |
| פינצטת ניתוח | Dumont | #2 | |
| מספרי ניתוח קטנים | F.S.T. | 14060-10 | |
| מדיום MEM Eagle | Cellgro | 50-019 PB | |
| סרום סוסים שעבר אינאקטיבציה בחום | Invitrogen | 26050-88 | |
| L-Glutamine (200 mM) | Invitrogen | 25030081 | |
| CaCl2 (1 M) | Sigma-Aldrich | C3881 | |
| MgSO4 (1 M) | Sigma-Aldrich | M2773 | |
| אינסולין (1 mg/ml), מומס ב-HCl 0.01 N | Sigma-Aldrich | I0516 | |
| חומצה אסקורבית, תמיסה (25%) | Sigma-Aldrich | A4544 | |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich | G5767 | |
| NaHCO3 | Sigma-Aldrich | S6014 | |
| Hepes | Sigma-Aldrich | H7523 | |
| סוכרוז | Sigma-Aldrich | S5016 | |
| תמיסת Phenol Red בריכוז 0.5% ב-DPBS | Sigma-Aldrich | P0290 | |
| KCl | Sigma-Aldrich | P3911 | |
| MgCl2 (1 M) | Sigma-Aldrich | M9272 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה