$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. צור מודל עכבר דמוי PCOS
הערה: העכברים ששימשו במחקר זה היו בעלי רקע מעורב (C57/B6, CD1, 129Sv) ונשמרו עם מזון ומים אד ליביטום, במחזור אור/חושך של 14/10 שעות ב-24°C.
- הכנת גלולות DHT
- צינורות סילסטיים אוטוקלאביים לעיקור. חותכים צינורות סילסטיים לאורך של 15 מ"מ עם סכין גילוח.
- אטמו צד אחד על ידי הזרקת סיליקון דבק רפואי לתוך הצינור עם מחט קהה 20 G המחוברת למזרק 3 מ"ל. יש להוציא את הבוכנה מהמזרק ולאחר מכן להכניס דבק למאגר. הבוכנה מוחדרת מחדש ונדחפת הדבק כלפי מטה עד שהיא מתחילה לצאת מהמחט. המחט הקהה נעשית על ידי חיתוך צד הקצה החד של מחט 20 גרם עם מספריים חזקים. אורך הסיליקון בצינור צריך להיות יותר מ -2 מ"מ כדי לאפשר חיתוך לאחר הייצור.
- יבש במשך הלילה; בדוק אם יש בועות אוויר בצד האטום. אלה ללא בועות אוויר משמשים לכדורי DHT. אחרים יכולים לשמש עבור כדורי בקרה ללא DHT.
- יש ללבוש כפפות, מסכה, משקפי מגן ומעיל מעבדה לפני הכנת כדורי DHT במכסה מנוע כדי למנוע חשיפה ל-DHT לעור.
- שפכו אבקת DHT לסירת שקילה מפלסטיק ולחצו את הצד הפתוח של צינורות הדבק (המיוצרים ב-1.1.1) לתוך אבקת ה-DHT.
- ניתן להדק אבקת DHT בעזרת אטב נייר גדול שמיישר. ממשיכים עד שה-DHT מגיע לגובה של 4 מ"מ (או האורך הרצוי). בדקו את אורך ה-DHT בעזרת סרגל, ואטמו את הצד הפתוח עם סיליקון, יבש למשך הלילה.
- חותכים כל צד אטום כדי להפוך את אורך הסיליקון לאורך 2 מ"מ. אורכו הכולל של הגלולה יהיה 8 מ"מ.
- אטמו את שני הצדדים של צינורות סילסטיים ריקים כגלולת בקרה (no-DHT).
- יש לשמור את הכדוריות בצינור חרוטי בנפח 50 מ"ל עטוף בנייר כסף (למניעת חשיפה לאור) בטמפרטורת החדר עד לשימוש. כדורי DHT שומרים על יעילות מלאה למשך 3 חודשי אחסון לפחות.
- הכנסה והחלפה של DHT
- עד 20 כדורי DHT או כדורי בקרה שקועים בנפרד בצינור חרוטי של 50 מ"ל עם 30 מ"ל מלח סטרילי 0.9% למשך 24 שעות ב-37°C לשיווי משקל ממש לפני החדרתם.
- לפני הניתוח מחטאים את המשטחים והכפפות באמצעות קלידוקס ומשטחי העבודה מכוסים בנייר סופג נקי מגובה פלסטיק (פד כירורגי). כל המכשירים הבאים במגע עם בעלי חיים עוברים טיהור לפני הכניסה למתקן בעלי החיים על ידי אוטוקלאבינג. המכשירים יורשו להתייבש ולהתקרר לפני השימוש.
- נקבות עכברים בנות חודשיים משמשות (4-5 עכברים / כלוב). עכברים מוזרקים תוך צפקית עם Xylazine (3.5 מ"ג / ק"ג bw) וקטמין (78.8 מ"ג / ק"ג bw) באמצעות מזרק אינסולין. חישובים עבור ערבוב ומינון הרדמה נמצאים בטבלה 1.
- לאחר השגת הרדמה מספקת, כפי שנמדד על ידי אובדן רפלקס הבוהן ונשימה איטית, העכבר יהיה מוכן לניתוח.
- לחטא את העור של האזור עם betadine באמצעות גזה סטרילית ונקי עם אתנול 70%. האזור ייצבע שוב עם betadine.
- חותכים חור באורך של כ-5 מ"מ עם מספריים מתחת לעור ליד הצוואר. באמצעות טרוכר 10 G, לעשות מנהרה קטנה (15 מ"מ) בכיוון רוסטרל. הגלולה מוחדרת באופן דורסלי עם הטרוכר.
- לאחר מכן אוטמים את הפתח בדבק כירורגי. קירוב ידני של קצוות הפצע בעזרת מלקחיים ומשיחות הברשה עדינות כדי למרוח סרט דק של דבק נוזלי על קצוות הפצע המשוערים. הצטברו 3 שכבות דקות של דבק כדי להבטיח שהדבק מפוזר באופן שווה על פני הפצע. הדבק צריך להשתרע 1 ס"מ בכל צד של קצוות הפצע apposed. ניתן להשתמש גם בתפר או קליפסים כירורגיים כדי לסגור את החור. החזירו עכברים לכלוב, עם כרית חום להתאוששות. יש להחליף את הגלולה כל 4 שבועות כדי לשמור על רמה קבועה של חשיפה לאנדרוגן. הגלולה המקורית תוסר ותוכנס גלולה חדשה כמתואר לעיל, במצב דומה.
| קטמין
(100 מ"ג/מ"ל)
| קסילזין
(100 מ"ג/מ"ל)
| מלוחים
(0.9%)
|
| 175 מיקרוליטר | 15 מיקרוליטר | 810 מיקרוליטר |
| הזרקה תוך צפקית של תמיסת עבודה: 0.1 מ"ל/20 גרם משקל גוף |
טבלה 1. קוקטייל קטמין/קסילזין.