$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. דיור בסיסי של עכברים
- מאכלסים את העכברים בכלובי פלסטיק עם תחתית ודפנות מוצקות, ושכבה של מצעים רכים וחומר קינון כמו גריסת נייר. השתמשו במצעים המורכבים מקלחי תירס גרוסים או שבבי עץ, והקפידו להחליף את המצעים באופן קבוע לצורך תברואה.
- לספק גישה למזון ומים עד לליביטום. בחלק העליון של כלוב הפלסטיק נמצא הופר מזון. יש להוציא כדורי מזון עכברים מנוסחים כראוי מהופר המזון ולספק מתקן מים. ודאו שגג הכלוב כולל מסנן אוויר להגנה על עכברים מפני מזהמים חיצוניים.
- שמרו על השעון הביולוגי הטבעי של העכברים על ידי ביצוע מחזור אור-חושך של 12 שעות במתקן הדיור. ערכו בדיקות התנהגותיות באותה שעה ביום, באופן אידיאלי במהלך המחזור החשוך של החיה, כגון בשעות הערב.
הערה: יש להקפיד להבחין בין עכברים בדיור. קיימות שיטות שונות להבחנה בין עכברים, כגון אגרופי אוזניים, תגי אוזניים וסימוני זנב.
2. מבוך בארנס בדיקות: בנייה
- הצטיידו בלוח עץ עגול בקוטר 120 ס"מ.
- חותכים 20 חורים עגולים (בקוטר 4.5 ס"מ) סביב היקף המעגל. מקמו כל חור במרחק של 2.5 ס"מ משפת המבוך ובמרחק של 13 ס"מ מהחורים השכנים.
- החליקו את המשטחים וצבעו אותם בלבן מבריק (מומלץ צבע בהיר).
- ייעדו צד אחד של לוח המבוך להחדרת ווי קטנים במרחק של כ-2-3 ס"מ מכל אחד מ-20 החורים והניחו שני ווים לכל חור (אחד מכל צד של כל חור).
- השתמש בדיסקים שחורים רדודים (פלסטיק) לכיסוי חורים בצד המבוך באמצעות ווים. השתמש ווים כדי לאבטח גומיות עבות כדי להחזיק את הדיסקים על החלק התחתון של המבוך.
- הרכיבו בבטחה את מבוך בארנס בגובה 120 ס"מ מעל הקרקע והרחק מחפצים אחרים בגובה דומה כמו שולחנות או כיסאות. ניתן להשתמש בקופסה או שרפרף כדי לתמוך במרכז המבוך.
- הניחו פוסטרים לבנים גדולים עם צורה אחת על כל קיר (משולש, עיגול וצלב) כרמזים מחוץ למבוך בשלושה צידי המבוך. שמרו את הכרזות על הקירות סביב המבוך לכל משפט.
- בצד האחרון של המבוך, הציבו וילון שחור מוצק כדי להסתיר את הצופים, כך שניתן יהיה לתעד נתונים במדויק מבלי שהחוקרים יהיו גלויים לעכברים במבוך.
- השהה מצלמת וידאו מעל הזירה עם מבט ממעוף הציפור על פני המבוך כולו.
- נקו כל משטח במבוך (כולל דיסקים שחורים וקופסת מטרה) במים ולאחר מכן בתמיסת אתנול 70% לפני ואחרי כל ניסוי בעכבר.
- מקם מקור אור של 100 ואט 25 ס"מ מעל מרכז המבוך (הפעלה/כיבוי בתחילת/סיום תקופת הניסיון) וודא שהדיסקים והווים פונים לרצפה.
הערה: יש לכבות את כל שאר האורות העיליים בחדר במהלך הבדיקה. מומלץ להוסיף מכונת רעש אולטראסונית התלויה ליד אור 100 וואט. הפעל/כבה אותו בתחילת/סיום של כל גירסת ניסיון.
3. בדיקת מבוך בארנס: נוהל
הערה: ודא שכל רכיבי המבוך מנוקים במים ותמיסת אתנול 70% לפני ואחרי כל ניסוי, מה שמאפשר זמן להתייבש לחלוטין לפני חידוש הבדיקה. הקפידו להכין חומרי ניקוי וכן טיימרים לניסויים.
- אכסנו את כל העכברים בקבוצות תוך שימוש בשיטת זיהוי אמינה. הרחיקו עכברים מחוץ לחדר הבדיקה כאשר הם אינם רצים באופן פעיל במבוך. זאת כדי להבטיח שהם לא יהיו נתונים לרעשן קולי בטרם עת.
- טפל בעכברים על ידי הרמה עדינה והחזקתם מבסיס הזנב, כאשר הכפות מוחזקות על היד.
- לצורך אימון, בקשו מהעכברים לרוץ במבוך מדי יום פעם ביום במשך 7 ימים ברציפות כדי להעריך למידה/רכישה.
הערה: ניסוי ארוך טווח יחיד יכול להיעשות במועד מאוחר יותר כדי להעריך זיכרון/שמירה. הפרוטוקול הנוכחי אימן עכברים מתבגרים החל מהיום שלאחר הלידה 32 וניסוי ארוך טווח בוצע במבוגרים בגיל 4 חודשים.
- הקצה באופן אקראי כל עכבר לחור יעד לשימוש לאורך תקופת הבדיקה. ניתן לסמן את החורים 1–20 בתחתית המבוך או בצד החיצוני של היקף המבוך, שם הם אינם גלויים לעכבר במבוך.
- החלף את דיסק החור שהוקצה בקופסה שחורה קטנה (23 x 11 ס"מ). חברו אותו היטב למבוך בארנס באמצעות גומיות המחוברות לווים הקרובים.
הערה: תיבת המטרה רדודה מספיק כדי שהעכבר יוכל בקלות לרדת לתוכה או מכילה צעד כדי להבטיח שהעכבר לא יצטרך לקפוץ לתוכו.
- הניחו את העכבר על מרכז המבוך מתחת לכוס כדי להתאקלם במשך 30 שניות עד לתחילת הבדיקה. התחל להקליט וידאו.
- הפעל את יצרנית הרעש הקלה והעל-קולית. הרימו את הכוס באמצעות מנגנון מיתרים כדי למנוע הטייה של הכותרת הראשונית של החיה. הפעל טיימר והתיישב מאחורי הווילון כדי להתבונן.
- לאחר שהעכבר נכנס לחור המטרה, כסו את החור באותה אטומה ששימשה בתחילת המשפט או בקלסר וכבו את הרעש האולטרסוני. אם העכבר לא נכנס למטרה לאחר שחלפו 5 דקות, הכניסו את העכבר לחור המטרה.
- ודא שהעכבר נכנס לחור. כאשר העכבר נמצא בתוך תיבת היעד, כסה את החור וכבה את יוצר הרעש. אפשר לעכבר להישאר בתיבת היעד למשך דקה אחת ללא הפרעה.
- למרות שחור המטרה יישאר קבוע עבור כל עכבר לאורך כל תקופת האימון, הפעל עכברים בסדר אקראי בכל יום כדי לוודא שהם לא עוקבים אחר רמזים/ריחות שהשאיר העכבר הקודם.