כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. אינדוקציה SE
- רכשו עכברי C57BL/6NHsd זכרים בני 8 שבועות ושקלו כל עכבר. לאחר מכן, השתמש בעט סמן כדי לסמן את הזנבות של כל העכברים לזיהויים בקלות במהלך השראת SE.
- חשב את כמות סקופולאמין מתיל ברומיד (סקופולמין; 2 מ"ג/ק"ג), טרבוטלין המיסולפט (טרבוטלין; 2 מ"ג/ק"ג) ופילוקרפין הידרוכלוריד (פילוקרפין; 280 מ"ג/ק"ג) בהתבסס על משקל העכבר והוסף מי מלח (0.9% NaCl, 10 מ"ל/ק"ג) לייצור תמיסות.
הערה: לדוגמה, אם משקל העכבר הוא 25 גרם, מוחלים הכמויות הבאות: סקופולמין וטרבוטלין: 2 מ"ג/ק"ג * (25 גרם/1,000 גרם) = 0.05 מ"ג, מלח: 10 מ"ל/ק"ג * (25 גרם/1,000 גרם) = 0.25 מ"ל, פילוקרפין: 280 מ"ג/ק"ג * (25 גרם/1,000 גרם) = 7 מ"ג, מלח: 10 מ"ל/ק"ג * (25 גרם/1,000 גרם) = 0.25 מ"ל.
- לטעון את תערובת scopolamine ו terbutaline מזרק 1 מ"ל עם מחט 30 גרם. הזריקו את התמיסה תוך צפקית לכל עכבר, ולאחר מכן החזירו את העכברים לכלוביהם. 30 דקות לאחר מתן סקופולמין וטרבוטלין, הזריקו תמיסת פילוקרפין לכל עכבר (כלומר; מזרק 1 מ"ל; 30 גרם מחט). מיד לאחר הזרקת פילוקרפין מניחים את העכברים באינקובטור (28-30 מעלות צלזיוס) להשגחה.
- עקוב בזהירות אחר התנהגות העכברים עד להשראת SE. אם מזוהים התקפים מוטוריים לימביים המתאימים לשלב 3 ומעלה על פי סולם ראסין, רשום את הזמן ועקוב אחר העכברים כדי לקבוע אם ההתקפים מתרחשים בתדירות גבוהה יותר. לאחר שהתקפים מוטוריים מתמשכים יותר מ-2 דקות, הכניסו את העכבר לכלוב חדש בטמפרטורת החדר והמשיכו לעקוב במשך 3 שעות כדי לקבוע אם ההתקפים העוויתיים שלהם נמשכים ו-SE מושרה. להרדים את העכברים שלא הצליחו להיכנס SE בערך 2 שעות לאחר הזרקת פילוקרפין.
הערה: קנה המידה של רסין; שלב 1, תנועת הפה והפנים; שלב 2, ראש מהנהן; שלב 3, קלונוס הגפיים הקדמיות; שלב 4, גידול עם קלונוס גפיים קדמיות; שלב 5, גידול ונפילה עם קלונוס גפיים קדמיות. אם העכבר אינו מועבר לכלוב בטמפרטורת החדר מיד לאחר השראת SE, העכבר יכול למות עקב היפרתרמיה.
- להפסיק התקפים חריפים התנהגותיים לאחר 3 שעות לאחר הופעת SE על ידי הזרקת תמיסת דיאזפם (כלומר; 10 מ"ג / ק"ג; מזרק 1 מ"ל; 30 גרם מחט). הפוך את תמיסת הדיאזפם על ידי דילול 5 מ"ג / מ"ל של דיאזפם ב 10% פוליאוקסיל 35 שמן קיק מוקשה על ידי הוספת מלח (כלומר; 10 מ"ל / ק"ג; 1 מ"ל מזרק; 30 גרם מחט).
הערה: 10% פוליאוקסיל 35 תמיסת שמן קיק מוקשה: 1 מ"ל פוליאוקסיל 35 תמיסת שמן קיק מוקשה + 9 מ"ל מלוחים. אחסנו את התמיסה בטמפרטורת החדר. לדוגמה, אם משקל גוף העכבר הוא 25 גרם, להזריק 250 μL של תמיסת דיאזפם: 50 μL 5 מ"ג / מ"ל דיאזפם + 200 μL 10% פוליאוקסיל 35 תמיסת שמן קיק מוקשה = 250 μL 1 מ"ג / מ"ל דיאזפם.
- עבור עכברי דמה, בצע הזרקת i.p. של תערובת scopolamine methyl bromide ו- terbutaline hemisulfate (כלומר; שניהם 2 מ"ג / ק"ג, 10 מ"ל / ק"ג; מזרק 1 מ"ל; 30 גרם מחט). 30 דקות לאחר מכן, הזריקו את המלח תוך צפקי (כלומר; 10 מ"ל/ק"ג; מזרק 1 מ"ל; 30 גרם מחט).
הערה: אם משקל גוף העכבר הוא 25 גרם, הזריקו 250 מיקרוליטר מלח במקום פילוקרפין.
- לאחר הזרקת דיאזפם (כלומר; מזרק 1 מ"ל; 30 גרם מחט), יש לתת 1 מ"ל של 5% דקסטרוז לכל עכבר בודד (כלומר; מזרק 1 מ"ל; 26 גרם מחט).
הערה: 1 מ"ל של הזרקת דקסטרוז 5% מספק מקור אנרגיה והידרציה שיכולים להגדיל את שיעור ההישרדות.
- במהלך הטיפול באינקובטור (28-30 מעלות צלזיוס), לנגב הפרשות מוגזמות כגון רוק, דמעות וצואה.
- ביום הראשון לאחר השראת SE, שקלו את העכברים ושמרו אותם באינקובטור (28-30 מעלות צלזיוס) ליום אחד נוסף. ביום השני, לאחר זירוז SE, שוקלים את העכברים ומחזירים אותם לכלוב הביתי שלהם. לספק צ'או לח כדי להקל על החלמתם.
הערה: בניסוי זה, שיעור התמותה עבור C57BL/6NHsd לאחר הפסקת SE היה 8.57% בממוצע (3 מתוך 35 עכברים שנבדקו).
- למדוד את משקל הגוף היומי של בעלי החיים עד 7 ימים לאחר פילוקרפין ולהזריק לעכברים 5% דקסטרוז (כלומר; 1 מ"ל מזרק; 26 גרם מחט) כאשר משקל הגוף לא עלה. להפסיק את ניטור משקל הגוף כאשר העכברים מתחילים לעלות מחדש במשקל הגוף לצרוך צ'או לח ללא קושי לאחר 2 ימים לאחר הזרקת פילוקרפין .
הערה: אם משקל הגוף של עכבר לא עלה עד 7 ימים לאחר SE, להוציא את העכבר מהניסוי ולהרדים על ידי פחמן דו חמצני. בהתאם לרקע של העכבר, המוות יכול להתרחש מדי פעם; עם זאת, במקרה של C57BL/6NHsd, פחות מ-1% מהעכברים מתו בניסויים אלה. עם הישרדות של יותר מ -7 ימים לאחר זירוז SE, העכברים לעתים רחוקות מתים במהלך התקופה הסמויה.
