הכנת אורגנואידים מגידולים: מודל גידול תלת מבחנה תלת ממדי

תקציר

מקור: Wadosky, K. M., et al. Generation of Tumor Organoids from Genetically Engineered Mouse Models of Prostate Cancer. J. Vis. Exp. (2019).

אורגנואידים שמקורם בגידולים הם סוג של מודל תרבית תאים תלת-ממדי שיכול לשמור על התכונות הפתולוגיות ושושלת התאים הספציפיים לאיברים של גידולים. בפרוטוקול לדוגמה, נראה מדענים מייצרים אורגנואידים מגידול בערמונית ממודל עכבר מהונדס גנטית.

פרוטוקול

הליכים בבעלי חיים המתוארים כאן בוצעו באישור הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) במחלקה למשאבי חיות מעבדה, מרכז הסרטן המקיף רוזוול פארק, באפלו, ניו יורק.

הערה: עכברים זכרים שיש לנתח כדי לבודד ערמונית או גידולים בערמונית ליצירת אורגנואידים היו צריכים לפחות להגיע לגיל בגרות מינית - בערך 8-10 שבועות של גיל. גילאים ספציפיים של עכברים יכולים להשתנות בין מחקרים. כמה גורמים שיש לקחת בחשבון בעת בחירת גיל כוללים שינויים תלויי גיל באוכלוסיית תאי הערמונית, ביטוי תלוי גיל של טרנסגנים ספציפיים המונעים על ידי מקדם Cre, וקצב התקדמות הגידול בערמונית ב- GEMM מסוים.

הער....

תוצאות

איור 1: תרשים זרימה של הפרוטוקול ליצירת אורגנואידים של גידול בערמונית. לאחר ניתוח הגידול בערמונית, לטחון את הרקמה לחתיכות 1 מ"מ. לעכל את חתיכות הגידול ב collagenase, לאסוף את התאים, ולעכל טריפסין כדי לקבל תרחיף תא בודד. לאחר ספירת תאים, יש להשהות מחדש את נפח המטריצה הדרוש לריכוז תאים של 1.0 x 10⁶ תאים/מ"ל. כיפות צלחת בצלחת בשיטת טיפה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
0.25% טריפסין+2.21 מ"מ EDTA	סיגמא	25-053
א83-01	MedChemExpress	HY-10432
DMEM/F12+++ מתקדמים	גיבקו	12634
איזון אנליטי	מטלר טולדו	30216623
B27 (פי 50)	גיבקו	17504044
קולגנאז II	גיבקו	17101015
מטריצת סרקומה EHS, Pathclear Lot#19814A10	יוצר ע"י Trevigen	נדרש מהמכון הלאומי לסרטן במעבדה הלאומית פרדריק	בעל מענקים מהמכון הלאומי לסרטן יכול לבקש מטריצה
HEPES (1 מטר)	סיגמא	25-060
גורם גדילה אפידרמיס רקומביננטי אנושי (EGF)	פפרוטק	AF-100-15
ל-גלוטמין (200 מילימול)	סיגמא	25-005
N-אצטיל-L-ציסטאין	סיגמא	A9165
פניצילין-סטרפטומיצין	סיגמא	עמ' 4333
איזון מדויק	מטלר טולדו	30216561
סכין גילוח פחמן בעל קצה יחיד	פישרברנד	12-640
Y-276632 (מעכב סלעים)	APExBIO	A3008