אקוקרדיוגרפיה של עכבר: טכניקה לא פולשנית להערכת מורפולוגיה של הלב

תקציר

מקור: Baudouy, D., et al. בדיקה אקוקרדיוגרפית והיסטולוגית של מורפולוגיה לבבית בעכבר. J. Vis. Exp. (2017).

סרטון זה מתאר פרוטוקול לביצוע אקוקרדיוגרפיה על עכבר מעבדה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. אקוקרדיוגרפיה

1. קבע את משקל הגוף של העכבר באמצעות איזון מעבדה סטנדרטי תוך החזקתו קלות בזנב כדי להבטיח מיקום נכון.
2. להרדים את בעל החיים על ידי הזרקה intraperitoneal (i.p.) של 50 מ"ג / ק"ג pentobarbital.
   הערה: ניתן להשתמש בכל סוג אחר של הרדמה אם נעשה שימוש באותו פרוטוקול לאורך כל המחקר. היתרונות והחסרונות יידונו להלן.
3. החזירו את העכבר לכלוב משלו והמתינו עד שהוא לא מגיב, הוא מראה נשימה יציבה ורפלקסים של כף הרגל האחורית נעדרים. כדי לבדוק זאת, לחץ מעט על כף הרגל ובדוק אם הרגל עדיין נסוגה.
4. יש לגלח את הצד השמאלי של בית החזה ואת בית השחי השמאלי באמצעות מכונת גילוח מסחרית למכרסמים.
   הערה: השימוש במכונת גילוח ייעודית למכרסמים מאפשר הסרה מלאה של שיער עכבר עדין כדי למנוע הפרעה במדידת אקו לב. קרמים מסחריים להסרת שיער או פתרונות יש להימנע, כפי שהם בדרך כלל מבושם, אשר יפריע לחיה לאחר שהוא מתעורר. הימנע גילוח מוגזם, כפי שהוא מגביר את אובדן החום.
5. הניחו את בעל החיים הישן על כרית חמה המוגדרת לטמפרטורה של 40-42 מעלות צלזיוס במצב רדוד בצד שמאל, כאשר הראש בשעה 12 והזנב בשעה 6. תקן את זרוע שמאל, רגל שמאל וזנב עם נייר דבק.
6. יש למרוח ג'ל אקוקרדיוגרפיה שחומם מראש על החזה המגולח ועל ראש המתמר.
7. מניחים את המתמר parasternal-שמאל, לכוון אותו לצד ימין של הצוואר כדי לקבל מבט דו ממדי (2D) parasternal ציר ארוך על רמת שריר papillary. סובב את המתמר ב-90° בכיוון השעון כדי לקבל מבט על ציר קצר ברמת שריר פפילרי. השתמש בהגדרת עומק מינימלית ובזום כדי למקסם את איכות התמונה ואת קצב המסגרות. הגדר את מהירות הטאטוא למקסימום.
   1. כדי להשיג הגדרות אלה, ניתן להשתמש באפשרויות שונות של הגדרת גודל תצוגה ועומק, בהתאם למכונה ולתוכנה. הקלט תמונות דו-ממדיות במצב M בתצוגת ציר קצר. עיינו באיורים 1A ו-B.
      הערה: היזהר להימנע מהפעלת לחץ מוגזם על החזה, שכן זה עלול לגרום ברדיקרדיה.
8. הקלט לפחות 3 סדרות של 3 לולאות פעימות לב עבור כל חיה.
   הערה: עבור תוכנת אקו לב המשמשת במחקר זה, לחץ על כפתור "רכישה/שמירה" פעם אחת בלבד. מתודולוגיה זו היא ספציפית אקו לב עם תוכנה מסוימת זו. ניתן להשתמש בחבילות תוכנה אחרות עם מחשבים שונים.
9. לאחר הקלטות מוצלחות, נגבו את ג'ל האקוקרדיוגרפיה מבית החזה של העכבר, משטח החימום ומהמתמר. הסר את הקלטת מהגפיים והזנב.
10. השאירו את העכבר תחת השגחה על כרית החימום, מכוסה ברקמה כדי למנוע חשיפה מיותרת לאור ואובדן חום, עד שהוא יתעורר.
11. החזירו את החיה לכלוב שלה.
12. נתח תמונות מוקלטות במצב M מתצוגת ציר קצר parasternal כדי לקבוע את הממדים והתפקוד של החדר השמאלי (LV). מדדו את עובי הדופן הקדמית של LV בסיסטולה ודיאסטולה (LVAWs ו-LVAWd), את הקטרים הפנימיים של LV את הקצה הסיסטולי ואת הקצה הדיאסטולי (LVIDs ו-LVIDd), ואת עובי הדופן האחורית של LV (LVPW) בסיסטולה ודיאסטולה (LVPWs ו-LVPWd) באמצעות זיהוי ממשק רקמה-דם בתמונות המאוחסנות.
13. מדוד את הממדים הדיאסטוליים בזמן הממדים הדיאסטוליים המקסימליים לכאורה של LV והממדים הסיסטוליים הסופיים של LV בזמן הטיול הסיסטולי הקדמי ביותר של הקיר האחורי של LV. הקש על מסך המגע על סמל "נתח" ולאחר מכן על סמל "LVAWd". מקם את הקליפר האלקטרוני על הממשק בין חלל החדר הימני לבין הקיר הקדמי LV בדיאסטולה.
14. מקם את הקליפר האלקטרוני על הממשק בין הקיר הקדמי LV לבין חלל LV כדי לקבל את עובי הדופן הקדמית הדיאסטולית LV; התוכנה תעבור ישירות למדידה הדיאסטולית הפנימית של LV.
15. מקם את הקליפר על הממשק בין חלל LV לבין הקיר האחורי LV כדי לקבל את הקוטר הסופי-דיאסטולי הפנימי של LV; התוכנה תעבור למדידת עובי הדופן האחורית של LV.
16. מקם את הקליפר על הממשק בין הקיר האחורי LV לבין קרום הלב כדי לקבל את עובי הדופן האחורית הדיאסטולית LV. עבור מידות סיסטוליות LV, הקש על מסך המגע על סמל "LVAWs" ומקם את הקליפר האלקטרוני על הממשק בין חלל החדר הימני לבין הקיר הקדמי LV בסיסטולה.
17. מקם את הקליפר האלקטרוני על הממשק בין הקיר הקדמי LV לבין חלל LV כדי לקבל את עובי הדופן הקדמית הסיסטולית LV. חזור על התהליך כמתואר לעיל עבור הקוטר הסיסטולי הסופי הפנימי של LV ועובי הדופן האחורית של LV. השתמש במוסכמה המובילה שאומצה על ידי האגודה האמריקאית לאקוקרדיוגרפיה כדי לעקוב אחר גבולות האנדוקרדיאל והאפיקרדיאלי.
    הערה: פרמטרים של פונקציית כיווץ LV יחושבו באופן אוטומטי באמצעות המדידות הקודמות. קיצור חלקי LV (FS) מוגדר כ- FS (%) = [(LVIDd - LVIDs)/LVIDd] x 100. מקטע פליטת LV (EF) מחושב באמצעות נוסחת Teicholz שהשתנתה, כאשר EF (%) = [(LVIDd³ - LVIDs³)/LVIDd³] x 100¹². עיין באיור 1A, B.
18. אחסן את הנתונים בקומפקט דיסקים או במקלות זיכרון מסוג USB וצור עותקי גיבוי.
19. ייבא, נתח וייצא את הנתונים באמצעות התוכנה המתאימה.

תוצאות

איור 1: אקוקרדיוגרפיה ברזולוציה סטנדרטית (>10 MHz) למדידת הממדים הסיסטוליים והדיאסטוליים של LV ותפקוד הלב בעכברים עם היפרטרופיה לבבית מורחבת לאחר אוטם שריר הלב לעומת חיות ביקורת. רישומי אקו לב מייצגים מעכברים תקינים ובריאים (A) ומבעלי חיים עם התרחבות LV ותפקוד LV מופחת לאחר אוטם שריר הלב (Tie2-CreERT2; PPARβ/δ + עכברי טמוקסיפן) (B). LVAW, LVID ו- L...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ג'ל שידור אולטרסאונד; ג'ל Aquasonic 100	פארקר
בדיקת אולטרסאונד ליניארית; L15-7io	Philips Healthcare
אקו לב; IE33 xMATRIX	Philips Healthcare
מכונת גילוח מכרסמים	מכשיר הרווארד	34-0243