הזרקה תוך צפקית של תאים: שיטה להעברת תאים סרטניים לרקמת השומן הצפקית של מודל מורין

תקציר

מקור: Krishnan, V. et al. גישות לחקר סרטן השחלות קולוניזציה גרורתית של מבני נקודות חלב בשומן הצפק. J. Vis. Exp. (2015)

בסרטון זה, אנו מבצעים הזרקה תוך צפקית של תרחיף תאי סרטן השחלות במודל עכבר כדי לחקור את ההתיישבות של תאי סרטן השחלות ברקמות שומן הצפק ואת גרורותיהן לאחר מכן.

פרוטוקול

כל ההליכים המערבים בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הזרקה תוך צפקית של תאים

הערה: בניסויים שלנו, עכברים מטופלים בזרימת אוויר למינרית או בארון בטיחות ביולוגית בתוך מתקן המחסום שלנו על מנת להגביל את הסיכון לחשיפה לפתוגנים. על מנת להדגים טכניקה זו בבירור, ההליכים בסרטון הנלווה נערכו במעבדה מאושרת לעבודה בבעלי חיים. טכניקה מסוימת זו אינה דורשת מבעלי החיים להיות תחת הרדמה. על פי פרוטוקולים מאושרים, בצע טכניקה זו על בעלי חיים חיים. השתמשו בזנים מתאימים של עכברים למחקר זה. לדוגמה: שימוש בעכברות עירומות אתימיות מדוכאות חיסון לחקר נשאות תאי סרטן השחלות האנושיים (SKOV3ip.1 ו-HeyA8); השתמש בעכברי C57BL/6 בעלי יכולת חיסונית לחקר נשאות תאי סרטן שחלה בעכבר (ID8).

1. יש להעמיס 500 μl של תרחיף תא בודד של תאי סרטן השחלות לתוך מזרק ולשים את המחט סטרילית מכסה 25 גרם. פעולה זו מפחיתה את גזירת התאים לפני ההזרקה.
2. הרימו את העכבר על ידי קשקוש הצוואר והחזיקו את הזנב באמצעות כף היד והאצבע המורה וקיבעו את הרגל האחורית השמאלית בין הטבעת לאצבע הקטנה (כאשר העכבר מרוסן ביד שמאל).
   הערה: כדי למנוע טראומה של איברי הבטן, יש לרסן היטב את העכבר כך שלא יוכל לזוז במהלך ההזרקה.
3. דמיינו קו לאורך הבטן ממש מעל הברכיים, ואתרו נקודה בצד ימין של החיה וקרוב לקו האמצע. נקודת הכניסה היא גולגולתית ומעט מדיאלית של הפטמה האחרונה.
   הערה: החדרת המחט בצד ימין של העכבר מונעת את הצקום ומפחיתה את הסיכון לניקוב המעיים.
4. הכנס את המחט באזור הצידי התחתון של בטן העכברים לעומק של כ -0.5 ס"מ. משוך לאחור את הבוכנה כדי לוודא שהמחט לא חדרה לכלי דם או לאיברי צפק אחרים.
   1. אם נוזל כלשהו נשאף, יש להשליך את המזרק (ואת הדגימה). שאיפה חומה-ירקרקה או צהובה מצביעה על חדירת מחט למעיים או לשלפוחית השתן, בהתאמה.
5. הזריקו את הדגימה בלחץ איטי ויציב. משוך את המחט והחזיר את העכבר לכלוב שלו. אין לסכם את המזרק לפני השלכתו במיכל חד.
6. להקריב עכברים באמצעות חנק_CO2 והסרת איברים חיוניים בנקודת זמן מסוימת לאחר ההזרקה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
DMEM	קורנינג	10-013-CV
PBS	קורנינג	21-040-CV	ללא סידן ומגנזיום
26 מחט מד	ב.ד.	329652