השגת תאי סרטן שחלות ראשוניים מדגימות מוצקות: שיטה לתרבית תאי סרטן שחלות אפיתל מדגימות גידול בשחלות

כל ההליכים המערבים משתתפים אנושיים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות, הלאומיות והבינלאומיות לרווחת האדם ונבחנו על ידי ועדת הבדיקה המוסדית המקומית.

1. עיבוד רקמות

1. בעבודה בתנאים סטריליים, העבירו את הדגימות לצלחת פטרי (60 מ"מ x 60 מ"מ) המכילה 10 מ"ל PBS טרי וקר כקרח והשתמשו בסכין גילוח סטרילי, חתוכה עוד יותר לחתיכות הקטנות ביותר האפשריות (2 מ"מ או פחות) (איורים 1A ו-1B).
2. מעבירים את הרקמות הטחונות לתוך צינור חרוטי של 15 מ"ל המכיל 10 מ"ל של dispase II (2.4 U/ml) שחומם מראש (37°C למשך 30 דקות) ב-DMEM ודגרים ב-5%_CO2 ו-37°C למשך 30 דקות. כדי להבטיח עיכול אופטימלי של הדגימות, באופן ידני לעורר את תרחיף התא כל 5 דקות.
3. לאחר דגירה של 30 דקות, מעבירים (באמצעות פיפטה סרולוגית של 10 מ"ל) את תרחיף התאים למסננת תאים (רשת של 70 מיקרומטר) המונחת על גבי צינור חרוטי של 50 מ"ל ומפעילים לחץ עדין על הרשת באמצעות בוכנה מזרק. השליכו כל רקמה לא מנותקת (שנותרה בחלק העליון של הרשת) ואספו את תרחיף התאים המתקבל בצינור החרוטי הסטרילי של 50 מ"ל. צנטריפוגה ב-320 x גרם למשך 7 דקות ב-4°C (איור 2).
4. יש להשליך את הסופרנאטנט ולהשהות מחדש את גלולת התא ב-10 מ"ל DMEM המכיל 10% FBS.
5. דגרו על תרחיף התאים בצלוחית פטרי בטמפרטורה של 5%_CO2 ו-37°C (איור 3).
6. החליפו את המדיום לאחר 24 שעות מהציפוי הראשוני. זה מאפשר הסרת פסולת סלולרית ואת רוב אריתרוציטים נוכח בתרבית.
7. שנה את המדיום כל שלושה ימים במשך השבועיים הבאים, ולאחר מכן התרביות של EOC ראשוני מוכנות ליישומים במורד הזרם.

איור 1. עיבוד דגימות קליניות. A) דגימה מוצקה המועברת לצלחת פטרי המכילה 10 מ"ל של PBS 1x טרי וקר כקרח. B) דגימות קליניות חתוכות עוד יותר לחתיכות בגודל של כ -2 מ"מ

איור 2. הפרדת תאי EOC מרקמות לא מנותקות. לאחר עיכול אנזימטי, הדגימות הקליניות מועברות למסננת תאים ולחץ עדין מופעל על הדגימות הקליניות המעוכלות באמצעות בוכנה מזרק. זה מאפשר ניתוק מכני של EOC מרקמות חיבור והתאוששות של תאי EOC

איור 3. ציפוי של השעיית תאי EOC וכתוצאה מכך. לאחר הסרת כל רקמות לא מנותקות, תרחיף התא הוא צנטריפוגה מושעה מחדש ב 10 מ"ל של DMEM המכיל 10% FBS מודגר בצלחת פטרי ב 5% CO2 ו 37 ° C