מאמר שיטה

השגת תאי סרטן שחלות ראשוניים מדגימות מוצקות: שיטה לתרבית תאי סרטן שחלות אפיתל מדגימות גידול בשחלות

30 באפריל 2023

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Pribyl, L. J. et al. שיטה להשגת תאי סרטן שחלות ראשוניים מדגימות מוצקות. J. Vis. Exp. (2014)

בסרטון זה אנו מתארים שיטה לבידוד ואפיון תאי סרטן שחלה ראשוניים מדגימות רקמת גידול שחלתית מוצקה. תאי סרטן האפיתל המתקבלים באמצעות פרוטוקול זה מתאימים להבנת התהליכים שעלולים להוביל להתחלת סרטן השחלות ולהתפתחותו.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים המערבים משתתפים אנושיים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות, הלאומיות והבינלאומיות לרווחת האדם ונבחנו על ידי ועדת הבדיקה המוסדית המקומית.

1. עיבוד רקמות

  1. בעבודה בתנאים סטריליים, העבירו את הדגימות לצלחת פטרי (60 מ"מ x 60 מ"מ) המכילה 10 מ"ל PBS טרי וקר כקרח והשתמשו בסכין גילוח סטרילי, חתוכה עוד יותר לחתיכות הקטנות ביותר האפשריות (2 מ"מ או פחות) (איורים 1A ו-1B).
  2. מעבירים את הרקמות הטחונות לתוך צינור חרוטי של 15 מ"ל המכיל 10 מ"ל של dispase II (2.4 U/ml) שחומם מראש (37°C למשך 30 דקות) ב-DMEM ודגרים ב-5%CO2 ו-37°C למשך 30 דקות. כדי להבטיח עיכול אופטימלי של הדגימות, באופן ידני לעורר את תרחיף התא כל 5 דקות.
  3. לאחר דגירה של 30 דקות, מעבירים (באמצעות פיפטה סרולוגית של 10 מ"ל) את תרחיף התאים למסננת תאים (רשת של 70 מיקרומטר) המונחת על גבי צינור חרוטי של 50 מ"ל ומפעילים לחץ עדין על הרשת באמצעות בוכנה מזרק. השליכו כל רקמה לא מנותקת (שנותרה בחלק העליון של הרשת) ואספו את תרחיף התאים המתקבל בצינור החרוטי הסטרילי של 50 מ"ל. צנטריפוגה ב-320 x גרם למשך 7 דקות ב-4°C (איור 2).
  4. יש להשליך את הסופרנאטנט ולהשהות מחדש את גלולת התא ב-10 מ"ל DMEM המכיל 10% FBS.
  5. דגרו על תרחיף התאים בצלוחית פטרי בטמפרטורה של 5%CO2 ו-37°C (איור 3).
  6. החליפו את המדיום לאחר 24 שעות מהציפוי הראשוני. זה מאפשר הסרת פסולת סלולרית ואת רוב אריתרוציטים נוכח בתרבית.
  7. שנה את המדיום כל שלושה ימים במשך השבועיים הבאים, ולאחר מכן התרביות של EOC ראשוני מוכנות ליישומים במורד הזרם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1. עיבוד דגימות קליניות. A) דגימה מוצקה המועברת לצלחת פטרי המכילה 10 מ"ל של PBS 1x טרי וקר כקרח. B) דגימות קליניות חתוכות עוד יותר לחתיכות בגודל של כ -2 מ"מ

figure-results-2
איור 2. הפרדת תאי EOC מרקמות לא מנותקות. לאחר עיכול אנזימט...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
1x PBS, סטריליInvitrogen14190-144
מכסה בורג, דגימת פוליפרופילן
מיכל, סטרילי		תרמו סיינטיפיק
DMEM בינוני, סטריליInvitrogen11995-065
סרום בקר עוברי, סטריליהיקלון תרמו-מדעיSH30396.03
100x פניצילין-סטרפטומיצין, נוזלInvitrogen15140-122
Dispase II, סטרילירוש04942 078 001
מלקחיים קטנים בעלי קצה דק ואזמל
להב, סטרילי		פישר סיינטיפיקמלקחיים: 08-953E, להבים:
08-927-5D
מספריים קטנים לניתוח, סטרילייםפישר סיינטיפיק08-945
15 מ"ל צינורות מכוסים חרוטיים, סטרילייםBD בז352097
50 מ"ל צינורות מכוסים חרוטיים, סטרילייםBD בז352027
10 מ"ל פיפטה סרולוגית, סטריליתקורנינג13-678-11E
6 מ"ל מזרק בוכנה, סטריליTyco Healthcare8881516911
מסנן ניילון (70 מיקרומטר) מסננת תאים,
עקר		BD בז352350
צלחת פטרי בקוטר 5 ס"מ, סטריליתקורנינג430166
צלחת פטרי 10 ס"מ, סטריליתקורנינג430167

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Dispase IIPBSFBS

מאמרים קשורים