דגימת רקמת סרטן הערמונית לבנקאות ביולוגית: טכניקה ממוקדת מונחית MRI להסרת אגרופי ביופסיה מרקמת גידול טרייה

תקציר

מקור: Heavey, S. et al. שימוש בנתוני דימות תהודה מגנטית וביופסיה כדי להנחות הליכי דגימה לביובנק של סרטן הערמונית. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים טכניקה מבוססת נתוני MRI כדי להתמקד באזורים ספציפיים המכילים גידול ברקמת הערמונית לצורך דגימה. דגימות הביופסיה שנאספו יכולות להיות מאוחסנות למטרות ביו-בנקאות או להשתמש בהן לניתוח במורד הזרם.

פרוטוקול

כל ההליכים המערבים משתתפים אנושיים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות, הלאומיות והבינלאומיות לרווחת האדם ונבחנו על ידי ועדת הבדיקה המוסדית המקומית.

1. מנגנון חיתוך הערמונית

1. רכשו את מכשיר חיתוך הערמונית (טבלת חומרים). לחלופין, הדפס ידית להב באמצעות מדפסת תלת-ממד.

2. מיקוד הגידול

1. סקור הערות קליניות כדי לזהות את הנגע האינדקס כפי שמצוין בביופסיה אבחנתית, למשל אחורי שמאלי.
2. סקור תמונות MRI כדי למדוד את מיקום הגידול הנ"ל.
   1. מצא את הרצף שבו הגידול הוא הנראה ביותר במישור הצירי, למשל, משוקלל T2.
   2. גלול בין תמונות ציריות כדי למצוא את התמונה שבה הגידול הוא הגדול ביותר והדפס את התמונה לעיון.
   3. בתמונת העטרה המתאימה, מדדו את המרחק מבסיס הערמונית למיקום הצירי שנבחר, ואת מלוא אורכה של הערמונית מקודקוד לבסיס (מ"מ), והדפיסו לעיון.

3. איסוף ערמונית

1. בדוק את הערות המטופלים כדי לוודא שהתקבלה הסכמה מדעת מתאימה להליך זה ולכל יישומי המחקר במורד הזרם.
2. לאחר כריתת ערמונית רדיקלית, יש לאסוף את הערמונית בסיר יבש. יש לוודא שלא נוסף פורמלין או חומר קיבוע אחר לערמונית.
3. העברה למקום סטרילי מתאים לדגימה, למשל מכסה זרימה למינרי במעבדה פתולוגית.
4. המשך לדגום בהקדם האפשרי אם נדרשת רקמה טרייה.
   הערה: עבור יישומים מסוימים (למשל, הערכה של DNA, אשר לא אמור להתפרק מהר כמו RNA), ייתכן שיהיה מתאים לקרר את הדגימה ולקחת דגימות למחרת.

4. הכנת הדגימות

1. הכינו מכסה מנוע זרימה למינרית ומנגנון חיתוך ערמונית על פי הליכי טיהור מקומיים, תוך שימוש בטכניקות סטריליות. כאן, רססו 70% אתנול ונגבו על כל המשטחים. השתמש מחטים חד פעמיות סטריליות ואזמלים. השתמש להבי פרוסה עד שלוש פעמים; יש לשטוף לאחר כל שימוש במי סבון חמים, ולאחר מכן לרסס ולנגב באתנול 70%.
2. לשקול את הערמונית (g) באמצעות משקל סטנדרטי.
3. דיו הערמונית. צבעו את צד שמאל בדיו כחול ואת צד ימין בדיו שחור. כסו את הקפסולה המלאה ואת שלפוחיות הזרע בדיו כדי לציין מאוחר יותר את שולי הניתוח.
   הערה: הליכי סימון בדיו עשויים להשתנות באופן מקומי וניתן לשנותם בהתאם.

5. חיתוך הערמונית

1. הרכיבו את מנגנון החיתוך על-ידי הכנסת הדפנות בניצב לבסיס המעמד (איור 1A).
2. הניחו את הערמונית כך שהבסיס והקודקוד פונים לקירות מנוגדים, כאשר הצד האחורי למטה והקדמי למעלה. מניחים סיכות זהב סביב הערמונית. דחפו מעט את הערמונית פנימה במידת הצורך כדי לקבל התאמה צמודה, שתתמוך בערמונית במהלך החיתוך.
3. מדדו את אורך הערמונית מהבסיס ועד לקודקוד באמצעות סרגל והשוו אותו לאורך הערמונית כפי שנמדד ב-MRI. אם הערמונית התכווצה, יש לבצע תיקון אד-הוק על המרחק הצפוי מהבסיס לפרוסה הרוחבית המטרה. לדוגמה, אם האורך המלא של הערמונית בתמונת MRI הוא 50 מ"מ, אך כאשר מודדים אותה באמצעות סרגל בשלב זה, זה מראה שהיא התכווצה ל -45 מ"מ, ואז להפחית את מיקום החיתוך הצפוי ב -10%.
4. מדדו מהבסיס לפרוסה הרוחבית הרצויה. בחרו את הסיכה הקרובה ביותר למדידה זו כדי לפרוס סביבה.
5. לבשו כפפות שרשרת כדי למנוע פציעה, החזיקו את התקן החיתוך (איור 1B), הניחו להבים משני צדי הסיכה שזוהתה והשתמשו בספייסר כדי לשמור על להבים במרחק של 5 מ"מ זה מזה. קחו פרוסה על-ידי הזזת הלהבים לאט ובחוזקה כלפי מטה, קדימה ואחורה במשיכות ארוכות (איור 1C). ודאו שהפרידו פרוסה מלאה לפני פירוק המנגנון.
6. הסירו את הקירות והסיכות והוציאו בזהירות את הפרוסה על יריעה סטרילית של לוח שעם בעזרת כפפות.

6. דגימת רקמות

1. בדוק חזותית את הפרוסה הרוחבית והשווה אותה לתמונת MRI צירית. במקרים מסוימים, אזור הגידול עשוי להיראות חיוור יותר מאשר הרקמה שמסביב.
2. מישוש את הפרוסה הרוחבית בעדינות. במקרים מסוימים, הגידול עשוי להרגיש מוצק יותר מאשר הרקמה שמסביב.
3. בעזרת תמונת MRI צירית כקו מנחה, בחרו אזור אחד או יותר לדגימה.
4. קח אגרופים ביופסיה של האזור הרצוי של הרקמה.
   1. באמצעות אגרוף 6 מ"מ, לדחוף כלפי מטה על האזור הרצוי של הרקמה.
   2. סובבו את אגרוף הרקמה במקום וכלפי מטה כנגד הפקק כדי להבטיח הפרדה מלאה והשתמשו באזמל חד כדי להפריד במידת הצורך.
   3. הסר את הניקוב והכנס אותו לצינורות/תבניות לפי הצורך על ידי פליטה באמצעות הבוכנה.
   4. יש לחזור על הפעולה להמשך דגימות הגידול והדגימות השפירות לפי הצורך, עם ניקובי ביופסיה סטריליים נפרדים. דיו את החורים שבהם אגרופים נלקחו באדום.
   5. שימו לב למיקום של כל אגרוף יחד עם משקל הערמונית וכל תצפית על צבע / מוצקות הרקמה.

תוצאות

איור 1: מנגנון חיתוך הערמונית.(A) הדפנות מוחדרות בניצב לבסיס, וסיכות זהב מוחדרות לבסיס המקיף את הערמונית (הערמונית אינה בתמונה). (B) הלהבים המקבילים הניתנים להחלפה מוכנסים לידית הלהב. (C) הלהבים עוברים בין סיכות הזהב כדי לחתוך קטע של 5 מ"מ מהערמונית

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ניקוב ביופסיה 6 מ"מ	פישר סיינטיפיק	13404607	אגרופי ביופסיה חד פעמיים להסרת דגימות רקמה 6 מ"מ
דיו שחור	לייקה ביוסיסטמס	3801753	סימון רקמות וצבע שוליים
דיו כחול	לייקה ביוסיסטמס	3801751	סימון רקמות וצבע שוליים
כפפת יד Chainmail	ארקו	1456803	כפפות שרשרת להגנה על היד במהלך החיתוך
לוח שעם	פישר סיינטיפיק	12396447	לוח שעם להצמדת הערמונית להליך הדגימה הבא
מחטים	SLS (ציוד מעבדה מדעית)	SYR6112	מחטים סטריליות לשימוש כדי להצמיד רקמה ללוח השעם לאחר הדגימה
ערמונית חותכת אפרטוס	המכון לחקר הסרטן, לונדון	NA - יש להשיג תחת MTA	ערכה המכילה את ידית כלי הפריסה, להבים, ספייסר, בסיס, דפנות וסיכות