$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כל ההליכים המערבים בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. דיסקציה של מערכת האורגניטל (UGS)
הערה: הסכמה מוצגת באיור 1.
- יש להרדים עכבר C57BL/6 זכר בן 3 חודשים באמצעות שיטת המתת חסד בשאיפהCO 2 או בטכניקה מאושרת אחרת.
הערה: עכברים בגילאי 3 עד 12 חודשים יכולים לשמש בהצלחה לניסוי. עכברים מבוגרים יותר (> 6 חודשים) יהיו ככל הנראה יותר שומן סביב UGS, אשר יהיה צורך לנקות. זיהוי והפרדה של האונות הוא לעתים קרובות קשה בעכברים מתחת לגיל 3 חודשים. זנים אחרים יכולים לשמש גם לניסוי .
- הניחו את העכבר על גבו ואבטחו את הרגליים באמצעות סיכות כך שהצד הגחוני של החיה חשוף.
- רססו אתנול 70% על בטנו של העכבר ונגבו אותו נקי.
הערה: אין צורך לגלח את שיער הבטן לפני נתיחה.
- הרימו את העור מהבטן, יחד עם שכבת השריר, בעזרת זוג מלקחיים בינוניים ובצעו חתך הפוך בצורת Y בבטן באמצעות מספריים.
- ראשית, בצעו חתך ישר עם זוג מספריים חדים ממש מעל הפין ועד עצם החזה (איור 2a).
- חתכו מבסיס החתך לכיוון כל בוהן, עד הירכיים (איור 2b). קפלו את העור לאחור משני הצדדים ובתחתית כדי לראות את כל אזור הבטן (איור 2c-e).
הערה: גודל החיתוך משתנה בהתאם לגיל העכבר ולגודלו. גודל החתך הישר הראשוני עשוי לנוע בין 1.5 ל -4 ס"מ, בהתאם לגודל העכבר.
- העבר את האיברים האחרים כדי לחשוף את ה- UGS. הרימו והזיזו את המעיים החומים-צהובים (איור 2f). הרימו את רפידות השומן הבטני (הרקמה הספוגית הלבנה האטומה) בעזרת מלקחיים והזיזו אותן לצדדים (איור 2g).
הערה: ה- UGS כולל את שלפוחית הזרע, השופכה, הערמונית, ductus deferens (vas deferens) ושלפוחית השתן. ניתן לזהות אותו על ידי זוג הקשתות החצי עגולות הלבנות האטומות (שהן שלפוחיות הזרע), כאשר שק שלפוחית השתן המלא בנוזל מחובר לבסיס. הרקמה השקופה הממוקמת ממש מתחת לשלפוחית הזרע היא הערמונית.
- אתר את ה- UGS, החזק בחוזקה את שלפוחית השתן במלקחיים קהה, והרם את כל ה- UGS כלפי מעלה מבטן העכבר.
הערה: אם שלפוחית השתן מלאה, יש לנקז אותה תחילה עם מזרק קטן כדי לספק אחיזה טובה יותר במלקחיים ולהפחית את הסיכון לקרע בשלפוחית השתן.
- ממשיכים למשוך למעלה על שלפוחית השתן, מחליקים זוג מספריים מתחת לשלפוחית השתן והערמונית עד עמוד השדרה, ומבצעים חתך. חתכו את כל החיבורים שנותרו לחלל הבטן (איור 2h ו-2i). היזהר לא לחתוך קרוב מדי UGS כדי למנוע חיתוך בשוגג דרך כל רקמת הערמונית.
הערה: בעת ביצוע החיתוך מתחת ל-UGS, יש להחדיר את המספריים עד לחלק האחורי של העכבר, כך שהחיתוך יצמיד גם את עמוד השדרה. שיטה זו גורמת לניתוק כמעט כל הקשרים בין ה-UGS לחלל הבטן בחיתוך אחד, ובכך מפחיתה את הזמן הדרוש לחילוץ הרקמה מהעכבר.
- הסר את ה- UGS ומקם אותו ב- 2-6 מ"ל (מספיק כדי לכסות את הרקמה) של מלח חוצץ פוספט (PBS) או מדיום הנשר המעובד של דולבקו (DMEM, גלוקוז גבוה) בצלחת פטרי של 6 ס"מ (איור 2j ו- 2k) והעבר אותו למיקרוסקופ דיסקציה (הגדלה פי 10).
הערה: שנה את מדיית הניתוח כנדרש בשלבים הנותרים.
