מיצוי אונה בודדת מהערמונית: טכניקה לקצירת אונות ערמונית בודדות מערמונית עכבר

תקציר

מקור: Nath, D. et al. זיהוי, אפיון היסטולוגי ודיסקציה של אונות ערמונית עכבר עבור מודלים של תרבית ספרואידית תלת ממדית במבחנה. J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מתאר טכניקה לקצירת אונות בודדות מבלוטת הערמונית של מודל עכבר. לאחר מכן ניתן להשתמש באונות בודדות לניתוח היסטולוגי ולחקר הסרטן.

פרוטוקול

כל ההליכים המערבים בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. אנטומיה גסה של הערמונית ומיקרודיסקציה של האונה הבודדת

הערה: זה מתואר באיורים 1(i-n) ובאיור 2

1. הפכו את הרקמה עם זוג מלקחיים קהים כך שהצד הגבי פונה כלפי מעלה, ומראים את האונות הגביות, המזכירות כנפי פרפר
.
2. אספו את האונות הגביות על-ידי החזקת האונה במלקחיים וצליפה בבסיס בעזרת מספריים (איור 1j).
3. הופכים את הרקמה הנותרת לצד הגחוני.
4. אספו את האונות הצידיות, שהן קטנות ובדרך כלל עוטפות את השופכה בצד, אשר תקועות בין האונות הקדמית, הגחונית והגבית (איור 1k).
5. לאחר מכן, אספו את האונות הגחון, שהן גדולות יותר מהאונות הצידיות, ושוכבות על השופכה הגחון (איור 1l).
6. לבסוף, קצרו את האונות הקדמיות, הגדולה מבין הארבע, על-ידי חיתוך והשלכת השופכה (איור 1m).
7. מעבדים את חלקי הרקמה בהתאם לצרכי הניסוי.

תוצאות

איור 1: דיסקציה של ערמונית העכבר. תמונות שלב אחר שלב לדיסקציה של ערמונית העכבר מה- UGS: (א) הסרת שומן, (ב) הסרת שלפוחית השתן, (ג) הסרת כלי הדם דפרנס, (ד) מבט גחוני של הערמונית עם השופכה, (ה) מבט גבי של הערמונית עם השופכה, (ו-ח) הסרת שלפוחיות הזרע, (i) מבט גחוני של הערמונית, (...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
כלי ניתוח עכבר (ערכת ניתוח עכבר)	מכשירים מדויקים בעולם	ערכת עכבר
מיקרוסקופ דיסקציה
סל"ד בינוני	תרמופישר סיינטיפיק	11875093
אמצעי דיסקציה (DMEM + 10% FBS)	תרמופישר סיינטיפיק	11965-084
סרום בקר עוברי	תרמופישר סיינטיפיק	10438018
PBS (מלח חוצץ פוספט)	תרמופישר סיינטיפיק	10010031
קולגנאז	תרמופישר סיינטיפיק	17018029	הכינו ציר פי 10 (10 מ"ג/מ"ל) בסל"ד, סיננו סטריליזציה, aliquot ואחסנו בטמפרטורה של -20°C
מזרקים ומחטים	פישר סיינטיפיק