דגימת תא בודד באמצעות מיקרומניפולציה: טכניקה לבידוד תאים בודדים מתרחיף תאים סרטניים

Abstract

מקור: Chen S. et al. Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization. J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מתאר את הטכניקה לבידוד תאים בודדים ממאגר של תאי מטרה לביצוע אנליזה במורד הזרם. בשיטה זו, מיקרומניפולטור המותאם למיקרוסקופ משמש לבידוד מדויק של תא מטרה יחיד.

Protocol

1. דגימה של תא בודד

1. מיקרומניפולציה
   הערה: כדי לאפשר יישומים במורד הזרם כמו ניתוח גנום שלם (WGA), תאים בודדים מבודדים יתווספו ל- 2 μL של תערובת אב ליזה של תאים. הכינו תערובת אב בהתאם למספר התאים שיש לעבד. חשב נפחים נוספים עבור אובדן עקב פיפטינג ומניחים את תערובת האב של ליזה התא על קרח.
   1. הכן תערובת אב ליזה של תאים (רכיבים של ערכת WGA, טבלת חומרים וריאגנטים). בקצרה, לערבב 2.0 μL של מאגר תגובה, 1.3 μL של octylphenoxypolyethoxyethanol (10% תמיסה), 1.3 μL של 4-(1,1,3,3-tetramethylbutyl) פניל-פוליאתילן גליקול (10% תמיסה), 2.6 μL של תמיסת פרוטאינאז K, ו 12.8 μL RNase / מים נטולי D....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
מלח חוצץ פוספט (1x PBS)	תרמו פישר סיינטיפיק	10010-015
צינורות Vacutainer EDTA (או Na-heparin)	ב.ד.	366450 (או 366480)	משמש כצינור תגובה ללכידת ex vivo של תאי מטרה
פיפטות פסטר 150 מ"מ	וולאק	D810	משמש ליישום בנפח נמוך של תאים ל- C&R
עט גריז	דקו	S2002	משמש במגלשות זכוכית להחזקת מתלה התא במקומו
Axiovert M200 מצויד Mikromanipulator MMJ ו CellTram vario	Zeiss/Eppendorf		השתמש במיקרומניפולציה בהישג יד
מיקרו-נימים (קוטר 25 מיקרומטר), CustomTip Type I	אפנדורף	930001201	משמש למיקרומניפולציה של תאים
0.2 מ"ל צינורות PCR	ביואנזים	710920