יצירת תאי סרטן ערמונית כימותרפיים: הליך להשגת תאי סרטן עמידים לתרופות במבחנה

במאמר זה

תקציר

מקור: Mohr, L. et al. יצירת מודלים של תאי סרטן הערמונית של עמידות לסוכן האנטי-מיטוטי Docetaxel. J. Vis. Exp. (2017)

סרטון זה מתאר פרוטוקול ליצירת מודלים של תאים עמידים לטקסאן של סרטן הערמונית. מודלים אלה יכולים לסייע בחקר המסלולים המעורבים בהתקדמות לעמידות לדוקטקסל בחולי סרטן הערמונית.

פרוטוקול

1. יצירת תאי סרטן ערמונית עמידים לדוקטקסל

הערה: בצע טיפולים תאיים באמצעות מלאי תמיסות Docetaxel המשמש לקביעת ריכוז התרופה IC50 (להכין מספיק מלאי מראש לשימוש ניסיוני). תאי ההורים צריכים להיות מגודלים במקביל בבקבוק קטן לאורך כל ההליך ולהיחשף לרכב (DMSO) בנפחים מתאימים המחקים את הכמויות המשמשות בצלוחיות המטופלות בדוסטקסל.

צלחת DU145 או 22Rv1 תאים ב 150 ס"מ² צלוחיות המכילות 20 מ"ל של מדיה (3.5 x 10⁶ תאים לבקבוק עבור DU145 ו 6.5 x 10⁶ תאים לבקבוק עבור 22Rv1). מומלץ להשתמש ב-10 עד 20 צלוחיות תאים כדי שיהיו מספיק תאים בסוף הפרוטוקול.
לאחר 24 שעות, כאשר התאים נמצאים במפגש של 70-80% (איור 1B, לפני Docetaxel), הוסיפו Docetaxel בריכוז IC50 (5 ננומטר עבור התאים המתוארים בפרוטוקול זה).
לאחר 72 שעות, שאפו מצע המכיל סמים והוסיפו מדיה טרייה ונטולת Docetaxel (איור 1B, 72 שעות אחרי Docetaxel). שנה את המדיה כל 3-4 ימים. בתוך כשבוע-שבועיים, שיבוטים עמידים יופיעו תחת המיקרוסקופ (איור 1B, 7 ו-14 ימים לאחר Docetaxel).
לשאוף מדיה, לשטוף בזהירות תאים עם 15 מ"ל PBS ולדגור עם 4 מ"ל 0.05% טריפסין-EDTA במשך 3-5 דקות ב 37 ° C כדי לנתק תאים מפני השטח של הבקבוק.
להשעות תאים טריפסיניים מן הבקבוק באמצעות 8 מ"ל של מדיה טרייה. תאי בריכה מכל הצלוחיות שטופלו. תאי גלולה על ידי צנטריפוגה (300 x גרם, 3 דקות, RT).
הסר את supernatant, להשהות מחדש את גלולת התא ב 20 מ"ל של מדיה טרייה צלחת התאים 150 ס"מ² צלוחיות (3.5 x 10⁶ תאים לכל בקבוק עבור DU145 ו 6.5 x 10⁶ תאים עבור בקבוק עבור 22Rv1).
לאחר 24 שעות, כאשר התאים נמצאים במפגש של 70-80%, הוסף שוב 5 ננומטר Docetaxel (ריכוז IC50 התחלתי).
חזור על שלבים 1.3 עד 1.6 ביום השלישי.
לאחר 24 שעות, כאשר התאים נמצאים במפגש של 70-80%, טפלו בהם בריכוז IC50 Docetaxel כפול (10 ננומטר עבור התאים המתוארים בפרוטוקול זה).
חזור על שלבים 1.3 עד 1.8, לאחר העלאת מינון של ריכוזי Docetaxel (25 nM, 50 nM, 100 nM ו- 250 nM), כדי ליצור אוכלוסייה יציבה של תאים הגדלים בצלוחיות תחת הריכוז הגבוה ביותר. עבור ריכוזים גבוהים יותר, פרוטוקול העלאת המינון יכול להיות מיושם עד 6 חודשים עד שמגיעים לריכוז של 1,000 ננומטר (איור 2A).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

figure-results-1
איור 1: יצירת מערכות מודל של תאי סרטן ערמונית עמידים לדוקטקסל.(A) דיאגרמה המתארת את קביעת Docetaxel IC50 בקווי תאי סרטן הערמונית DU145 ו- 22Rv1 (שלב 1 של הפרוטוקול). האחוזים הצפויים של כדאיות התא והריכוזים העולים במינון Docetaxel הדרושים נכללים. גרפים מייצגים של כדאיות תאים DU145 ו- 22Rv1 המציינים 5 ננומטר כ- IC50 לאחר 72 שעות של חשיפה ל- Docetaxel כלולים. הניסויים הם טריפליקטים, והנ...