מאמר שיטה

אפיון עמידות לכימותרפיה תפקודית: שיטה להערכת עמידות לתרופות בתאים סרטניים באמצעות בדיקה קלונוגנית

30 באפריל 2023

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Mohr, L. et al. יצירת מודלים של תאי סרטן הערמונית של עמידות לסוכן האנטי-מיטוטי Docetaxel. J. Vis. Exp. (2017)

סרטון זה מתאר שיטה להערכת עמידות לתרופות כימותרפיות בתאי סרטן הערמונית באמצעות בדיקת היווצרות מושבה. בדיקה זו יכולה לשמש ככלי פונקציונלי לזיהוי מנגנונים מולקולריים ותאיים חדשים של עמידות לכימותרפיה בתאים סרטניים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. אפיון פונקציונלי של עמידות דוקטקסל נרכשת על ידי בדיקת היווצרות מושבה

הערה: בפרוטוקול זה, עמידות לכימותרפיה הוערכה באמצעות מבחני היווצרות מושבות. ניתן להשתמש בשיטות חלופיות המשמשות להערכת כדאיות התא (כלומר, מבחני MTS) בהתבסס על העדפות החוקרים.

  1. צלחת 2,000 תאים (DU145 או 22Rv1, הן עמידים בפני ההורים והן בפני Docetaxel) לכל באר בצלחות של 6 בארות, תוך שימוש ב- 2 מ"ל מדיה לכל באר.
  2. לאחר 24 שעות, להוסיף ריכוזים הולכים וגדלים של Docetaxel (תאי ההורים: 0.25, 0.5, 1, 2.5 ו 5 ננומטר; תאי DR: 50, 125, 250, 500 ו-1,000 ננומטר). עבור קווי תאים DU145 ו- 22Rv1. הוסף DMSO רק לבאר אחת וכן בקרה באותו נפח המשמש למינון הגבוה ביותר של Docetaxel.
  3. לאחר 72 שעות, שאפו את המדיה המכילה סמים והוסיפו מדיה טרייה ללא Docetaxel.
  4. דגרו על צלחות במשך 1-2 שבועות עד שהמושבות נראות מתחת למיקרוסקופ.
  5. כדי להכתים את המושבות, שטפו אותן בעדינות עם PBS של 2-3 מ"ל ודגרו עם תמיסת קריסטל סגולה 2-3 מ"ל (0.1% w/v ב-10% פורמלין) למשך 20 דקות בתוך מכסה המנוע של תרבית הרקמה או מכסה אדים.
  6. יש להסיר את תמיסת הצביעה, לשטוף צלחות עם 2-3 מ"ל של H2O, להסיר H2O ולייבש את הצלחות באוויר.
  7. נתח את התוצאה על ידי הדמיה של הבארות וספירה ידנית של מושבות בעזרת עט סמן (כדי להימנע מספירת אותן מושבות פעמיים) וייצג את אחוז הכדאיות של התא בגרף. צלמו תמונות דיגיטליות של הלוחות לייצוג דמויות (איור 1A).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: אפיון פונקציונלי ופנוטיפי של מודלים של תאים עמידים לדוקטקסל.(A) בדיקות היווצרות מושבה מייצגות של תאים עמידים להורים ולתאים עמידים לדוקטקסל שטופלו בריכוזי Docetaxel שצוינו במשך 72 שעות. אחוז המושבות לכל ריכוז טיפול מיוצג בגרף המצורף. הניסויים הם טריפליקטים והנתונים מייצגים את הממוצע ± SD. פסי קנה מידה = 5 מ"מ. (B) גידול בקיפול mRNA יחסי של DR/הורים שכומת על יד...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תאי DU145 ATCC HTB-81
22Rv1 תאים ATCCCRL-2505
Docetaxel סלק כימיקלים S1148 ב-DMSO (10mM)
בקבוק תרבית רקמה 150 מ"ר בז355001
צלחות תרבית רקמה 6 בארות בז353046
סל"ד 1640 בינוני גיבקו11875093בתוספת 10% FBS ו-1% פניצילין/סטרפטומיצין
פאונדיישן B סרום בקר עוברי ג'מיני900208
1X מלח חוצץ פוספט (PBS) קורנינג 21-040-ס"מ
0.05%טריפסין-EDTA גיבקו 25300-062
פניצילין-סטרפטומיצין גיבקו15140122
קריסטל ויולט סיגמא-אולדריץ'C0775
10% תמיסת פורמלין סיגמא-אולדריץ'HT501128

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

DocetaxelCrystal Violet

מאמרים קשורים