גידול בקפסולה כליה Xenografting: טכניקה ליצירת מודל ניסיוני של בעלי חיים להערכת סרטן הערמונית

תקציר

מקור: Nicholson, T. M. et al. השתלת קסנוגנזה של קפסולה כלייתית והשתלת כדוריות תת עורית להערכת סרטן הערמונית והגדלה שפירה של הערמונית. J. Vis. Exp. (2013)

בסרטון זה, אנו מדגימים השתלה של שתלי רקמת סרטן ערמונית שמקורם בבני אדם לתוך קפסולת הכליה של עכבר מושתל מדוכא חיסון. טכניקה זו יכולה לשמש כדי להעריך את התקדמות הגידול ולפתח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הליך כירורגי: כמוסת כליות Xenografting

1. לפני השראת הרדמה, התבונן בעכבר כדי להבטיח בריאות ורווחה.
2. הכניסו את העכבר לתא להשראת הרדמה איזופלורנית בשיעור של 3-5%. כאשר בעל החיים הפסיק לזוז וקצב הנשימה ירד, העבר לקונוס האף במצב נוטה, ושמור על הרדמה ב 1-3%.
3. במידת הצורך, השתמש בקוצץ כדי לגלח את גב העכבר. זה לא נחוץ בעת שימוש בעכברים עירומים אתימיים (nu/nu).
4. הפעל לחץ חזק על הרשת של כף הרגל האחורית המורחבת כדי להעריך את הלימות ההרדמה. אם העכבר מגיב ללחץ, נדרש זמן רב יותר כדי שההרדמה תיכנס לתוקף. במידת הצורך, התאימו מעט את זרימת ההרדמה כדי להשיג הרדמה מספקת.
5. כאשר העכבר מורדם כראוי, יש לחטא את אתר הניתוח בתמיסת יוד כירורגית (בטדין) ואחריה 70% אלכוהול.
6. לבשו כפפות ושמלות סטריליות; מרחו וילונות סטריליים על אתר הניתוח. הרימו את העור האחורי בעזרת זוג מלקחיים עם שיניים, ובעזרת המספריים הגסים בצעו חתך בקו האמצע הגבי בקו האמצע בקו 2-3 ס"מ.
7. בעזרת מספריים קהות או בדיקה מפרידים את הדרמיס התחתון מדופן הגוף (משני צידי החתך להשתלה דו צדדית או בצד אחד להשתלה חד צדדית).
8. מקם מחדש את העכבר למצב רוחבי וזהה את מיקום הכליה על ידי צפייה בפרופיל הכליה דרך דופן השריר. הפעלת לחץ ידני עדין עם האגודל והאצבע המורה על הבטן עשויה לסייע בהדמיה של איברים פנימיים.
9. באמצעות מספריים קשתית עדינה והקפדה על הימנעות מכלי דם גדולים ועצבים בעמוד השדרה, לבצע חתך של 1 ס"מ בדופן הגוף במקביל לעמוד השדרה. יש להרחיב חתך זה ל-1.5-2.0 ס"מ (מעט ארוך יותר מהציר הארוך של הכליה) על ידי פתיחה עדינה של המספריים לרווחה לאחר הכנסתם לחתך הראשוני.
10. החלק החיצוני של הכליה על ידי הפעלת לחץ עדין מחוץ לדופן השריר משני צדי הכליה באמצעות האצבע המורה והאגודל. תוחבים את שולי העור מתחת לכליה החיצונית, אשר תונח על דופן הגוף. בעוד הכליה היא חיצונית, לשמור על הידרציה של כמוסת הכליה על ידי החלת מלוחים סטריליים.
11. באמצעות מלקחיים עדינים #5, להרים בעדינות את כמוסת הכליה מן parenchyma של הכליה, ועם אזמל בסדר, לעשות חתך 2-4 מ"מ בכמוסה. גודל החתך נקבע על פי גודל השתל אך יש למזער אותו כדי לשמור על שלמות הקפסולה.
12. יש לתפעל פיפטה פסטר מזכוכית שנמשכה דק ומלוטש באש עם קצה מעוגל וסגור מתחת לקפסולה המשיק לפני השטח של הכליה. פתח בעדינות כיס קפסולה קטן עבור השתלים, תוך זהירות רבה לא לפגוע פרנכימה כליות.
13. הקצה החתוך של קפסולת הכליה מורם עם המלקחיים העדינים, והשתל מוכנס לכיס שמתחת לקפסולה באמצעות פיפטת זכוכית מלוטשת אש. ניתן להציב מספר שתלים מתחת לכמוסת הכליה ובמרווחים שווים על פני הכליה.
14. אם במהלך השתלת הקפסולה מתייבשת, יש להרטיב אותה על ידי החלת מי מלח סטריליים.
15. לאחר השלמת ההשתלה, הרימו בעדינות את צידי החתך בדופן השריר כדי להחליף את הכליה בחזרה לחלל הגוף. שימו לב שהשתלים אינם מחליקים החוצה מתחת לכמוסה.
16. סגור את דופן השריר בתפר יחיד (תפר 4-0, FS-2 vicryl). ניתן לחזור על ההליך הכירורגי על הכליה הנגדית על ידי מיקום מחדש של העכבר.
17. בעזרת מלקחיים יש ליישר את קצוות החתך בעור ולמרוח 2-3 קליפסי פצע כירורגיים לסגירת החתך. מתן שיכוך כאבים (אנו משתמשים 5-10 מ"ג / ק"ג carprofen באמצעות זריקה תת עורית) ומניחים את העכבר במצב שכיבה לרוחב בכלוב ההתאוששות. הקפידו לשמור על טמפרטורת הגוף עם חום מנורה או כרית חימום. שימו לב להתאוששות מלאה של העכבר, אשר אמור להתרחש בתוך פחות מ -15 דקות.
18. יש לעקוב אחר עכברים במשך 24 השעות הבאות לאיתור סימנים של כאב לאחר הניתוח, דימום ו / או סיבוכים אחרים. לבדוק באופן קבוע חתכים כירורגיים עבור סימנים של זיהום.
19. הסר אטבי פצעים עם מכשיר להסרת קליפס פצע כירורגי 7-14 ימים לאחר הניתוח.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
שמלת ניתוח סטרילית	אספקה וטרינרית במערב התיכון	350.79866.2
מסכה כירורגית	אספקה וטרינרית במערב התיכון	350.50111.2
כפפות סטריליות	קימברלי קלארק	55092
קוצץ פצעים רפלקס	פ.ס.ט.	12031-09	התאמה עם גודל קליפס הפצע
תפר Vicryl	אספקה וטרינרית במערב התיכון	295-92100.2	4-0, FS-2, נספג
מספריים ישרים חדים/קהים	כלים מדעיים משובחים (F.S.T.)	14054-13
מלקחיים Graefe (סראט, שיניים, מעוקל)	פ.ס.ט.	11055-10
וופורייזר איזופלורן	סופרה הרדמה אינוב	VAP3000
תא אינדוקציה	סופרה הרדמה אינוב	RES644
פיפס זכוכית פסטר	פישר סיינטיפיק	S67050	אורך 5 אינץ'
מלקחיים Graefe (סראט, מעוקל)	פ.ס.ט.	11052-10
מלקחיים Graefe (סראט, ישר)	פ.ס.ט.	11050-10
בטדין	וובסטר וטרינרי	07-836-3379
מי מלח סטריליים	אספקה וטרינרית במערב התיכון	193.74504.3	NaCl 0.9%, הזרקה
אפליקטור קצה כותנה	אספקה וטרינרית במערב התיכון	001.06220.2
קליפסים לפצעים	בריינטרי סיינטיפיק	ACS CS	עשוי להשתמש בקליפסים בגודל 7 מ"מ או 9 מ"מ
איזופלורן	אספקה וטרינרית במערב התיכון	193.33161.3
מיקרוסקופ מנתח	לייקה	L2
חרוט אף עכברים קטן	סופרה הרדמה אינוב	ACC526
מד זרימת חמצן	סופרה הרדמה אינוב	אוקסי660
האם מסיר קליפים	פ.ס.ט.	12033-00	עולמי