מאמר שיטה

Deparaffinization ו rehydration של קטעי רקמות: הליך דו-שלבי להסרת שעוות פרפין משקופיות רקמת FFPE ואחריו התייבשות רקמות

30 באפריל 2023

במאמר זה

תקציר

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Sugimoto, K. et al. ניתוח גנומי של מתילציה של DNA בסרטן מערכת העיכול. J. Vis. Exp. (2020)

בסרטון זה, אנו מדגימים את העיבוד של FFPE או חלקים משובצים פרפין קבוע פורמלין המתקבלים מרקמת הגידול במערכת העיכול. שלבי deparaffinization ו rehydration מאפשרים עיבוד של דגימת הרקמה עבור יישומים אנליטיים הבאים.

פרוטוקול

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים המערבים משתתפים אנושיים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות, הלאומיות והבינלאומיות לרווחת האדם ונבחנו על ידי ועדת הבדיקה המוסדית המקומית.

1. שטיפת המגלשות

  1. הכינו 10 מיקרומטר של חלקים לא מוכתמים משובצים פרפין קבוע פורמלין (FFPE).
  2. מקם שקופיות במחזיק שקופיות זכוכית: השתמש בכ-3-5 שקופיות חתך גדולות ביותר, אלא אם הרקמה מינימלית, ויש צורך בשקופיות נוספות.
  3. מלא את מחזיק השקופיות ב- Xylene, וודא שכל הרקמה בשקופית שקועה במים. אפשר לשבת במשך 15 דקות.
  4. לאחר 15 דקות, לשפוך את Xylene עם שקופיות מוחזק עם קצה פיפטה כך שקופיות לא ליפול.
  5. יוצקים פנימה עוד קסילן באותה רמה כמו קודם. אפשר לשבת עוד 15 דקות.
  6. לאחר 15 דקות, יוצקים שוב את הקסילן.
  7. מלא את מחזיק השקופיות ב-100% אתנול (EtOH), וודא שכל הרקמה בשקופית שקועה במלואה. אפשר לשבת במשך 3 דקות.
  8. שפכו את ה-EtOH תוך כדי אחיזה זהירה במגלשות. מלא מחדש לאותה רמה עם יותר EtOH. אפשר לשבת במשך 2 דקות.
  9. שפכו שוב את ה-EtOH והוציאו את המגלשה. הניחו אותם בזהירות עם הפנים כלפי מעלה על מגבת נייר נקייה לייבוש. אפשר לשבת במשך 10 דקות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
קסילן סיגמא-אולדריץ'214736
100% אתנול סיגמא-אולדריץ'24194

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Xylene TreatmentEthanol GradientTissue SectioningHistological PreparationParaffin RemovalTissue ProcessingSlide Holder

מאמרים קשורים