כל ההליכים המערבים משתתפים אנושיים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות, הלאומיות והבינלאומיות לרווחת האדם ונבחנו על ידי ועדת הבדיקה המוסדית המקומית.
1. צביעה
- לפני שתמשיך עם צביעה, נגב את כל התמיסות העודפות סביב הרקמה בשקופית עם נייר טישו.
- הניחו את המגלשות בתנאי טמפרטורת החדר ולחות החדר כדי למנוע התייבשות של הרקמה על המגלשה לאורך כל תהליך הצביעה.
- לחמצן את המגלשות עם כמה טיפות של אשלגן permanganate במשך 5 דקות. ודא כי נפח permanganate אשלגן מספיק כדי לכסות את החלק הרקמה על כל שקופיות.
- שוטפים את המגלשות המחומצנות במים מזוקקים בצנצנת קופלין עם 2-3 החלפות. שימו לב לצבע הכחול של הרקמה.
- כעת, הלבינו את השקופיות הללו על ידי הוספת כמה טיפות של חומצה אוקסלית למשך 5 דקות. ודאו שנפח החומצה האוקסלית מספיק כדי לכסות לחלוטין את קטע הרקמה בכל שקופית.
- שטפו את המגלשות על ידי טבילתן בצנצנת קופלין מלאה במים מזוקקים. בצע את השטיפה 2x-3x.
- כעת, שטפו את המגלשות הללו לזמן קצר ב-95% אלכוהול, ולאחר מכן טבלו את המגלשות בתמיסת אלסטין (5 גרם לליטר) למשך 8-24 שעות<בר/>
הערה: תמיסת אלסטין היא נדיפה, וזמן הצביעה שלה ארוך יחסית, ולכן עדיף לטבול את המגלשות בכתמים אלסטיים במיכל אטום, כמו בקבוק זכוכית שקוף עם פקק איטום. קיבולת המיכל ונפח תמיסת האלסטין תלויה במספר המגלשות השקועות, כל עוד היא מאפשרת טבילה מלאה של כל המגלשות.
- לטבול שקופיות אלה ישירות באתנול 95% במשך 1-2 דקות כדי להבדיל היטב בין כל מקטע רקמה.
הערה: בידול מתייחס לשינוי במטען של קטע הרקמה, אשר מסיר את הכתמים העודפים שנספגים על ידי הרקמה והופך את הצבעים ברורים יותר. לאחר צביעת תמיסת אלסטין, אין לשטוף דגימות במים מזוקקים כדי למנוע כל קושי בהבחנה. בדקו מיקרוסקופית, לפי הצורך, אם יש כתמים בסיבים אלסטיים כחולים-שחורים ורקע אפור. עדיף מעט להבדיל את הרקמה מכיוון שכתם הנגד של ואן גיסון שלאחר מכן יכול גם לחלץ במידת מה את הכתם האלסטי.
- יש לשטוף את המגלשות במלואן במים מזוקקים לאחר ההבדלה.
- כתם נגדי את המגלשות בתמיסה של ואן גיסון למשך דקה < />
הערה: נפח הפתרון של ואן גיסון צריך להספיק כדי להיות מסוגל לטבול את קטע הרקמה בכל שקופית לחלוטין.
