מאמר שיטה

פיצול ספרואידים לתת-תרבית ומשלוח: הליך להפצה והעברה של ספרואידים מגידול נוירואנדוקריני במעי הדק

30 באפריל 2023

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Ear, P. H. et al. הקמה ואפיון של ספרואידים סרטניים נוירואנדוקריניים במעי הדק. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים אסטרטגיה לפצל ולהפיץ ספרואידים שפותחו מתאי גידול נוירואנדוקריניים במעי הדק. לספרואידים אלה יש סמני גידול נוירואנדוקריניים במעי הדק וניתן להפיץ אותם ולהשתמש בהם בהמשך לבדיקת תרופות נגד סרטן.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. פיצול ספרואידים SBNET

הערה: הדבר נעשה לצורך הרחבה ושיתוף עם חוקרים אחרים.

  1. השתמש פיפטה P1000 כדי לשבור מכנית את ECM ולשאוף ECM עם spheroids SBNET לצינור סטרילי 1.5 מ"ל.
  2. צנטריפוגה ב 1,000 x גרם ב 4 ° C, להסיר את כל supernatant ומניחים את הצינור על קרח.
  3. הוסף פי 2-4 מהנפח של ECM החדש לכדור. ערבבו את ה-ECM החדש עם כדורי ה-ECM וה-SBNET הישנים על ידי פיפטציה מעלה ומטה פי 10, תוך הימנעות מהחדרת בועות אוויר.
  4. העבר 5-20 μL של תערובת הספרואידים ECM ו- SBNET לצלחת חדשה ואפשר ל- ECM להתמצק.
  5. מכסים במדיום SBNET חדש ומעבירים לחממה. שיעור ההחלמה הוא כ-95% עד 100%.
  6. למשלוח ספרואידים SBNET למעבדה אחרת, העבר ספרואידים SBNET עם ECM חדש לבקבוק T25 ואפשר ל- ECM להתמצק.
  7. מלא את בקבוק T25 בתווך ספרואידי SBNET, הברג את המכסה בחוזקה והכן את חבילת המשלוח.
  8. עם קבלת תרבית ספרואידים SBNET, הסר את מדיום התרבית ובצע שלבים 1.1 עד 1.5 כדי להחזיר את ספרואידים SBNET לתרבית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DMEMגיבקו11965-092בינוני להכנת רקמות
DMEM/F-12גיבקו11320-033בינוני לתרביות אורגנואידים
פ.ב.ס.גיבקו16000044מגיב למדיה תרבותית
גלוטמיןגיבקוA2916801מגיב למדיה תרבותית
אינסוליןסיגמאI0516מגיב למדיה תרבותית
מטריג'לקורנינג356235מטריצה להטמעה ועיגון
אורגנואידים
ניקוטינאמידסיגמא72340מגיב למדיה תרבותית
עט/סטרפגיבקו15140-122מגיב למדיה תרבותית

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

ECMECM

מאמרים קשורים